论文部分内容阅读
水貂是珍贵的毛皮动物，具有很高的经济价值。与其它大家畜相比，先进的繁殖生物技术在水貂繁殖上的应用严重滞后。卵母细胞的冷冻保存技术是最重要且最基本的一项生物技术，目前在脂肪含量低的哺乳动物的卵母细胞上已经比较成熟且广泛应用。但是对脂肪含量高的动物的卵母细胞来说，其冷冻保存效率低下，如何提高其冷冻保存效率是当今生物科学研究的热点之一。甘氨酸(Glycine，Gly)和褪黑素(Melatonin，MT)在提高小鼠等含脂量低的卵母细胞冷冻保存效率方面的研究已经得到充分的验证，然而其能否提高脂肪含量极高的水貂卵母细胞的冷冻保存效率还需深入研究。本试验以水貂生发泡期(Germinal vesicle，GV)卵母细胞为研究对象，进行GV期卵母细胞玻璃化冷冻、解冻后体外成熟，采用免疫荧光、qRT-PCR等方法，探讨玻璃化冷冻、解冻及培养过程添加1mM的Gly或10-9M的MT对水貂卵母细胞质量的影响，包括卵母细胞复苏率、核成熟率、线粒体和皮质颗粒的分布以及卵母细胞周围颗粒细胞的糖酵解相关基因（Ldh1、Pkm2、Pfkp）表达量的变化。进而从基因、细胞器和细胞多个水平上研究添加Gly和MT对水貂卵母细胞冷冻保存效率的影响。本试验研究结果如下: 1.水貂GV期卵母细胞玻璃化冷冻、解冻及体外成熟过程中添加1mM的Gly（73±1.8％vs55±4.1％）或10-9M的MT（70±2.7％vs55±4.1％）可以显著提高卵母细胞的GVBD率(P＜0.05)。 2.水貂GV期卵母细胞玻璃化冷冻及解冻过程中添加1mM的Gly（54±3.2％vs30±2.3％）可以显著降低冷冻引起的卵母细胞线粒体损伤(P＜0.05)，提高了活性线粒体的正确分布。 3.水貂GV期卵母细胞玻璃化冷冻、解冻及体外成熟过程中添加1mM的Gly（42±4.2％vs34±1.8％）可以显著减少冷冻引起的卵母细胞皮质颗粒的损失(P＜0.05)，提高了皮质颗粒正确分布。 4.水貂GV期卵母细胞玻璃化冷冻及解冻过程中添加1mM的Gly或10-9M的MT可以显著提高水貂GV期卵母细胞周围颗粒细胞糖酵解相关基因(Ldh1、Pkm2、Pfkp)的表达(P＜0.05)。 5.水貂GV期卵母细胞玻璃化冷冻、解冻及体外成熟过程中添加1mM的Gly或10-9M的MT均可提高卵母细胞的冷冻保存效率。添加1mM的Gly在提高线粒体分布、皮质颗粒分布等方面要显著优于10-9M的MT(P＜0.05)，但在核成熟上，两者之间差异不显著(P＞0.05)。