【摘 要】
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目的:1.构建载药囊泡模型。体外通过对细胞进行一系列刺激,促使细胞分泌细胞外囊泡,从而构建载药囊泡。2.构建细粒棘球蚴原头节体外模型,研究在体外载药囊泡对细粒棘球蚴原头节活性的影响,与常规给药途径相比是否更具优越性,并初步探究体外抗细粒棘球蚴原头节的潜在作用机制。方法:1.载药囊泡模型的构建与鉴定。实验主要分为三组,加入不同浓度的阿苯达唑（albendazole,ABZ）粉剂（ABZ加药浓度分别为
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目的:1.构建载药囊泡模型。体外通过对细胞进行一系列刺激,促使细胞分泌细胞外囊泡,从而构建载药囊泡。2.构建细粒棘球蚴原头节体外模型,研究在体外载药囊泡对细粒棘球蚴原头节活性的影响,与常规给药途径相比是否更具优越性,并初步探究体外抗细粒棘球蚴原头节的潜在作用机制。方法:1.载药囊泡模型的构建与鉴定。实验主要分为三组,加入不同浓度的阿苯达唑（albendazole,ABZ）粉剂（ABZ加药浓度分别为200、400、600μM）,进行紫外线照射（UVB,300 J/m21 h）,照射后孵育,最后通过超高速差速离心法获得沉淀,重悬,即获得所需要的载药囊泡。通过液相色谱仪确定200、400、600μM的载药囊泡组中的最佳载药量;然后通过透射电镜、激光粒度仪来观察载药囊泡形态。2.研究在体外与载药囊泡共培养时,细粒棘球蚴原头节活性的变化。根据载药囊泡组的最佳载药量,确定ABZ粉剂组的加药量。根据本体外实验需要,将主要分为:1640培养基空白对照组、空载囊泡组、载药囊泡组、ABZ粉剂组。培养7天,每隔1天更换培养基并加入相应的药物,随机抽出部分细粒进行伊红染色,然后将其置于倒置显微镜下观察原头节活性变化,计算存活率;原头节培养3d、5d、7d后,使用半胱天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）检测试剂盒分别检测各实验组酶活性。结果:1.载药囊泡模型。细胞经过加入ABZ粉剂、紫外线照射等一系列刺激后,细胞的数量较前减少、形态发生改变、部分裂解。通过使用液相色谱仪检测载药囊泡的有效药物浓度,200、400、600μM组中的最佳ABZ加药浓度为400μM。经过透射电镜、激光粒度仪的检测,载药囊泡的形态符合细胞外囊泡的特征。2.体外实验共培养。各实验组与原头节共培养7天后,随着时间的增加,不同组的存活率下降幅度不同,以载药囊泡组原头节活力下降幅度最大（F=180.306,P＜0.05）。在第7d,载药囊泡组与ABZ粉剂组原头节活力降低,空白对照组（91.15±1.07）%与空载囊泡组（88.90±1.43）%两实验组的原头节活性未见明显变化（P＞0.05）。载药囊泡组（45.32±0.98）%、ABZ剂组（64.46±1.19）%均下降,并且载药囊泡组存活率下降明显（F=1021.17,P＜0.05）。Caspase-3酶活性结果显示,在第7d,空白对照组（52.93±1.46）μmol/L与空载囊泡组（53.08±1.60）μmol/L相比未见明显变化（P＞0.05）。载药囊泡组（61.99±1.14）μmol/L、ABZ粉剂组（57.32±1.81）μmol/L与空白对照组、空载囊泡组相比均有提高,且载药囊泡组酶活性明显高于ABZ粉剂组（F=23.816,P＜0.05）。结论:1.使用细胞外囊泡承载ABZ,改变ABZ的剂型,弥补了ABZ的一些缺点,提高了ABZ对细粒棘球蚴的杀伤效果。
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