CO1在侧耳属物种快速鉴定中的应用

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本文以侧耳属(Pleurotus)16个主要种为试验材料,根据实验室已有的侧耳属CO1基因序列信息,设计引物C0332F和C0332R,以cDNA为模板PCR扩增CO1的编码区序列,扩增产物经克隆、测序。使用软件DNAMAN和ClustalX分析试验材料的CO1编码区序列,结果表明:侧耳属种间CO1编码区序列比较保守,序列同源性在0.888-1.000之间。结合侧耳属CO1编码区序列和CO1基因序列,进一步分析发现侧耳属CO1序列间的差异主要在于内含子,其中,P. ostreatus、P. citrinopileatus、P. cornucopiae和P. eryngii var. tuoliensis序列大小分别为:1777 bp、1675 bp、2059 bp和1718 bp,序列间有1个内含子插入;P. eryngii、P. pulmonarius、P. abieticola、P. tuber-regium和P. rattenburyi序列大小分别为:3454 bp、3462 bp、3441 bp、3631 bp和4913 bp,序列间有2个内含子插入;P. australis和P. smithii序列大小分别为:4641 bp和4453bp,序列间有3个内含子插入;而P. calyptratus、P. cystidiosu、P. djamor、P. dryinus和P. eryngii var. ferulae序列间无内含子插入,大小均为321 bp。为了更加快速的鉴定侧耳属属内各种,本文以引物C0332F和C0332R为基础进行PCR扩增,可先将PCR扩增产物按条带大小分为四组,第一组为P. calyptratus、P. cystidiosu、P. djamor、P. dryinus和P. eryngii var. ferulae;第二组为P. ostreatus、P. citrinopileatus、P. cornucopiae和P. eryngii var. tuoliensis;第三组为P. eryngii、P. pulmonarius、P. abieticola和P. tuber-regium;第四组为P. rattenburyi、P. australis和P. smithii,然后根据各组菌株CO1序列间的差异,设计每个菌株的特异性引物,菌株只有使用特异引物扩增的情况下才能扩增出目的条带。根据扩增出条带的大小和有无可以准确快速的鉴定供试16个菌株。
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