固定化酶技术经过半个多世纪的发展后，柔性固定化，即在固定化载体上接上一些足够长度的亲水分子链（柔性链），再将酶键合到柔性链上的固定化技术，成为该技术领域的研究热点。该柔性链可提高载体表面的柔韧性、亲水性，减少固定化过程中酶分子所受到的碰撞力，从而较好的维持酶蛋白的正常构象和自由度、保留其游离态的均相催化活性。本研究以乙二胺、己二胺、癸二胺为柔性臂，制得交联壳聚糖-二胺衍生物微球；并以此微球为载体，对葡萄糖氧化酶（GOD）进行固定化。研究表明，乙二胺、己二胺、癸二胺-交联壳聚糖（ethylenediamine-，hexamethylenediamine-，decamethylenediamine-crosslinked chitosan，缩写为CCE，CCH，CCD）为载体时，固定化过程所需的pH均靠近7.0，所需酶/载体氨基摩尔比、戊二醛浓度、交联时间各不相同。其中CCH所需的酶/载体氨基摩尔比和戊二醛浓度最大，分别为2.1×10^-4、0.35mol/L；交联时间最短，为2.1h。对最佳条件下制备的固定化GOD进行荧光分析，表明CCH微球的内表面积最大、孔道分布最均匀，因此固定化酶活力回收最高。固定化GOD的动力学研究表明，扩散系数（De）、载体半径（r0）、底物浓度（s0）对于固定化酶的动力学有不同程度的影响。扩散系数与载体半径的影响较显著；且扩散系数越大，载体半径越小，越有利于底物扩散。底物浓度对于固定化酶的动力学的影响较小，但适当提高底物的浓度可提高反应速率、节约生产成本。三种柔性手臂接枝的固定化酶的耐酸性、耐热性优良，重复使用稳定性好，可长久储存。4℃下储存240天之后，CCH为载体时，活力回收达到了88.1%；CCE，CC，CCD为载体时，活力回收分别为84.9、81.8、80.5%。