目的:研究临床经验方通窍明目4号对高眼压模型大鼠视网膜中基质金属蛋白酶9(MMP-9)及水通道蛋白4(AQP4)表达的影响,以探讨中药方剂对视神经保护的分子学作用机制。方法:选择8-12周龄、体重200±12.09g、雌雄各半SD大鼠323只,采用前房注射复方卡波姆方法建立大鼠慢性高眼压模型。造模成功后按体重随机分为空白组和实验组,空白组为17只大鼠,实验组又分为三组,分别为实验高眼压1周组(实高1组)、高眼压2周组(实高2组)、高眼压3周组(实高3组),每组大鼠102只。每一实验组再分6组,分别为通窍明目4号低剂量组、中剂量组、高剂量组,对照组(VitB1、VitB12灌胃)、模型1组、模型2组(生理盐水灌胃),每组大鼠17只。模型1组给药前处死并取材,其余持续给药两周后处死并取材。采用免疫组化法及Western blot法观察AQP4和MMP-9的表达。结果:1、免疫组化及免疫印迹检查下对MMP-9表达的提示:三组高眼压组各组内比较均提示正常状态下,MMP-9呈现低表达状态,当受到高眼压的影响后,MMP-9表达上调,维持一段时间后,又逐渐下降。其中3周高眼压组组间比较不具有统计学意义,说明高眼压三周后MMP-9的表达已经明显减少。纵向组间比较可知,MMP-9在正常视网膜为低表达状态,在出现眼压升高的情况下,各高眼压组MMP-9表达发生上调,第1周末达到高峰,以后逐渐减少,高表达持续较长时间,直至第4周时才恢复正常水平。通窍明目4号治疗后对MMP-9表达的提示:组内比较显示1周高眼压组中各治疗组均可使MMP-9下降的趋势减慢,且这种作用高剂量组优于中低剂量组和对照组,中低剂量组和对照组未达到治疗效果。2周高眼压组中高中剂量组和对照组MMP-9的表达均高于模型2组,且高中剂量组MMP-9的表达显著上调,高于模型1组和低剂量组。3周高眼压组高剂量组治疗后可使MMP-9的表达上调,其他各治疗组上调的作用不具有统计学意义。纵向组间比较显示,各治疗组均可使MMP-9表达上调,其中高剂量组作用最强。2、免疫组化及免疫印迹检查下对AQP4表达的提示:三组高眼压组各组内比较均显示AQP4在空白组呈低表达,受到高眼压影响后,AQP4的表达上调即模型1组,但随着高眼压持续时间的延长,AQP4的表达又呈现下降趋势即模型2组;纵向组间比较可知,AQP4在正常情况为低表达状态,在出现眼压升高的情况下,AQP4表达发生上调,第1周末的时候达到高峰,以后逐渐减少,高表达持续较长时间,直至第4周时才恢复正常水平。通窍明目4号治疗后对AQP4表达的提示:三组高眼压组各组内比较均显示,各治疗组与模型2组比较差异无统计学意义,未起到治疗作用。其中高眼压2组中通窍明目4号高低剂量组和对照组使AQP4的表达发生了上调。高眼压3周中通窍明目4号低剂量组和对照组使AQP4的表达又发生了上调。纵向组间比较显示各药物治疗组未能抑制AQP4的表达。其中2周高眼压组中通窍明目4号高低剂量组和对照组使AQP4的表达上调较1、3周高眼压组为最高。结论:通窍明目4号可以促进MMP-9表达上调,减轻高眼压造成的视网膜病理改变,纠正可逆的变性细胞,减轻高眼压状态下的视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡,促进神经的再生,发挥视神经保护作用。机制可能与破坏MMP-9的天然抑制剂,改变基因转录率,激活MMP-9酶原的活性有关。通窍明目4号对AQP4未起到抑制作用。