siRNA沉默MACCI对HeLa细胞的增殖与侵袭性影响研究

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jitic
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近几年来宫颈癌已经成为临床上最为常见的妇科恶性肿瘤,对广大女性的生命健康造成严重威胁。临床上迫切需求对宫颈癌的发病机制及基因调控相关因子表达的手段进行理解和探讨。HeLa细胞是宫颈癌细胞的一种,临床常被用来进行相关宫颈癌发病机理研究。结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)最开始被认为仅仅是与结肠癌密切相关的重要基因之一,经过近几年的研究,发现结肠癌转移相关基因1能够影响包括卵巢癌、肺腺癌、肝癌等多种肿瘤组织细胞的增殖能力或者向周边组织浸润、侵袭的能力,进而影响肿瘤的发生发展和转移。然而,MACC1在宫颈癌HeLa细胞中的表达水平以及沉默MACC1后对宫颈癌HeLa细胞的增殖和侵袭性影响目前尚不清楚,本研究将对MACC1与宫颈癌HeLa细胞的增殖及侵袭性的相关性进行探讨,以填补这一方面的研究空白。  目的:  探讨MACC1在HeLa细胞中的表达水平以及沉默MACC1对HeLa细胞增殖和侵袭性影响。  方法:  (1) RT-PCR检测HeLa细胞与正常细胞中MACC1表达水平;(2)选取siRNA沉默序列;(3)培养HeLa细胞、正常细胞和MACC1沉默HeLa细胞;(4) siRNA转染后,采用Western blotting方法,检测MACC1蛋白在HeLa细胞中的表达;(5) siRNA转染后,采用MTT方法,检测HeLa细胞增殖能力的变化情况;(6) Western blotting法检测siRNA转染后E-cadherin及N-cadherin表达水平;(7) Transwell实验检测细胞的体外迁移能力。  结果:  (1)正常细胞中MACC1相对表达水平为1.612,HeLa细胞中MACC1的相对表达水平为4.625,两者相比具有明显统计学差异(P<0.001);(2) siRNA序列5’-GUGCUCAGGACUGAUGAAATT-3’能够有效抑制MACC1表达;(3)利用siRNA转染抑制MACC1基因的表达之后,细胞增殖率仅为正常HeLa细胞以及对照组细胞的71%;(4)在培养液中加入siRNA之后,E-cadherin的表达水平上调而N-cadherin的表达水平出现下调;(5)在进行siRNA转染之后,Transwell小室实验中迁移到下室的细胞数量明显要少于未转染siRNA的HeLa细胞。  结论:  (1) HeLa细胞中MACC1表达水平明显高于正常细胞;(2) siRNA沉默序列5’-GUGCUCAGGACUGAUGAAATT-3’(表达干扰序列)抑制MACC1表达效果显著,该序列可以用于MACC1沉默的相关实验;(3) MACC1表达被沉默之后,宫颈癌HeLa细胞增殖率变化显著,增殖能力受到明显抑制;(4) MACC1的表达对宫颈癌HeLa细胞的侵袭能力起到增强作用;(5) MACC1沉默抑制了宫颈癌细胞(HeLa)的迁移,HeLa细胞中存在的MACC1蛋白能够促进细胞(HeLa)的迁移。
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