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目的：了解天津市耐药结核病的流行现状及其危险因素,北京基因型结核分枝杆菌在人群中的流行现状及其在耐药结核病传播中的作用,揭示天津地区耐药结核分枝杆菌四种一线抗结核药物耐药相关基因的突变类型、突变频率及其与耐药表型和北京基因型的关系,结核分枝杆菌药物外排泵基因的表达与耐药表型、耐药相关基因突变型的关系。对象和方法：1.耐药结核病流行情况：研究对象为2008年1月至2009年6月,在天津市结核病控制中心、天津市10个区县结防机构就诊的结核分枝杆菌分离培养阳性肺结核患者。采用“世界卫生组织/国际防痨与肺部疾病联合会”推荐的比例法,对研究对象初次分离培养获得的菌株进行利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇的药物敏感实验。运用横断面调查的方法描述耐药结核病的流行情况。2耐药结核病危险因素分析：对以上研究对象,采用单因素非条件和多因素非条件logistic回归分析从社会人口学、菌株相关实验室信息、临床信息和结核病管理信息四个方面分析耐多药结核病和其他耐药结核病的危险因素。3北京基因型菌株的流行情况：对从以上研究对象初次分离的结核分枝杆菌菌株,采用多重PCR方法鉴定北京基因型菌株,并分析北京基因型菌株的分布特征及其与耐药表型的关系。4耐药相关基因突变的研究：对从以上研究对象初次分离的全部耐药结核分枝杆菌菌株采用直接测序法检测以下耐药相关基因的突变情况并分析耐药相关基因突变型与耐药表型和北京基因型的关系：异烟肼耐药株：katG、inhA、 oxyR-ahpC、ndh;利福平耐药株：rpoB;链霉素耐药株：rpsL和rrs;乙胺丁醇耐药株：embB、embC和embA。5药物外排泵表达量的研究：研究对象为2007年天津市结核病控制中心参比室库存的71株菌株。采用real-time RT-PCR方法检测药物外排泵基因Rv1258c、 Rv1410c、Rv2136c、Rv0783c和Rv1819c的表达与耐药表型、耐药相关基因突变型的关系。结果：1.耐药结核病流行现状：共纳入肺结核患者656例,其中初治568例,复治88例。药物敏感试验结果显示：总耐药率为26.98%(177/656),初治病人耐药率为24.47%(139/568),复治病人耐药率为43.18%(38/88)；总耐多药率为6.25%(41/656),初治病人耐多药率为3.70%(21/568),复治病人耐多药率为22.73%(20/88)。2耐药结核病危险因素分析：耐多药结核病与以下因素有关：年龄组(30-49岁/≥50岁,OR=3.000,95%CI:1.121-8.024)、胸片受累肺野数(6个/1-5个,OR=3.153,95%CI：1.187-8.378)、结核病治疗史(复治/初治,OR=6.984,95%CI:3.250-15.009)和督导员(其他督导员/医务人员,OR=2.935,95%CI：1.204-7.152)。未发现有关因素与其他耐药结核病有关。3北京基因型菌株的流行情况：分离到的656株结核分枝杆菌中,北京基因型菌株占91.46%(600/656),其分布与天津市户籍(χ2=4.26,p=0.039)和年龄≥55岁(χ2=4.03,p=0.045)有关,未发现北京基因型菌株的特殊耐药型。4耐药相关基因突变的研究：异烟肼耐药株katG突变率为49.09%(54/110),其中47株(42.73%)为katG315ACC(Thr), inhA-15C→T突变率为24.55%(27/110), oxyR-ahpC突变率为11.82%(13/110),未检测到ndh突变,异烟肼耐药株总突变率为85.45%(94/110),katG315位突变与异烟肼耐药株同时对其他药物耐药有关。利福平耐药株rpoB基因突变率为88.46%(46/52),以利福平耐药决定区内突变为主,531、526和516位密码子的突变率分别为50.00%(26/52)、23.08%(12/52)和5.77%(3/52),rpoB突变与利福平耐药株联合链霉素、链霉素和异烟肼有关。链霉素耐药株rpsL突变率为73.27%(85/116),rrs突变率为14.66%(17/116),总突变率为87.07%(102/116),rpsL基因突变与北京基因型菌株有关。乙胺丁醇耐药株embB基因突变率为27.27%(9/33),embC突变率为3.03%(1/33),未见embA突变。embB突变与多药耐药有关。5.药物外排泵基因表达量的研究：Rv1258c表达阴性。与全敏菌株相比,Rv1410c表达量在以下耐药菌株中表达量升高：链霉素(t=2.18,p=0.034),异烟肼(t=2.20,p=0.032),异烟肼+链霉素(t=2.43,p=0.021),≥2种抗结核药(F=3.60,p=0.018)；Rv2136c：异烟肼(t=2.03,p=0.047),耐多药(t=2.22,p=0.037),异烟肼+链霉素(t=2.28,p=0.029)。Rv0783c的表达量：利福平耐药株rpoB531位密码子突变菌株高于该位点未突变的利福平耐药株(t=2.84,p=0.016)。结论：1年龄在30-49岁、胸片受累6个肺野、结核病治疗史、受非医务人员及非家庭成员(其他督导员)督导,是耐多药结核病的危险因素。因此在结核病防控工作中应对肺结核病人群的此类特征加以关注并采取相应措施。2未发现北京基因菌株具有特殊的耐药型。北京基因型菌株是天津市的主要流行株,在年龄≥55岁的人群中传播较广。3耐药相关基因突变是天津市结核分枝杆菌耐药的主要分子机制,rpsL基因突变与北京基因型有关。本研究结果将为研发结核分枝杆菌药物敏感性检测的新方法提供依据。4Rv0783c的高表达与利福平耐药株rpoB531位密码子突变有关。Rv1410c和Rv2136c表达量可做为鉴定结核分枝杆菌多药耐药性的指标。