辣椒花药培养及再生植株技术研究

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本文针对辣椒花药培养目前存在的问题,在前人研究的基础上,以12个辣椒品种为试材进行了辣椒花药培养,对培养中胚状体的诱导主要因素以及成苗技术进行了摸索,以期为辣椒花药培养技术在实践中的应用奠定一定的技术基础。研究内容及结果如下:1.通过对12种辣椒材料花蕾、花药外部形态和小孢子分裂时期的观察对比,找到了期间的对应关系,即:当花瓣微露、白绿色、萼瓣等长或瓣稍长、花药顶端紫色且紫色部分不超过花药的四分之三时,此时大多数花粉细胞处于单核靠边期至双核早期。这一判别标准在后期的实践中证明是行之有效的。2.对Nitch,NTH,MS 3类9个培养基的诱导情况进行比较,发现:基础培养基的种类对于辣椒花药培养中胚状体诱导是重要影响因子,在本试验中,MS培养基的诱导效果最好;基础培养基对于花药愈伤组织的诱导并不是十分重要的影响因素,植物生长调节剂浓度是愈伤组织诱导的影响因子。3.在植物生长调节剂对辣椒花药培养的影响方面,本研究比较了不同浓度的KT与2,4-D和KT与NAA两组培养基的诱导效果,结果显示,较低浓度的植物生长调节剂利于胚状体的诱导,较高浓度时利于愈伤组织的诱导;不同植物生长调节剂的组合和浓度下,胚状体诱导率差异很大(0.75%~19.03%);不同基因型所适应的植物生长调节剂的种类和浓度差异很大,在KT 0.05mg/L + 2,4-D 0.005 mg/L组合下胚状体诱导率达到本试验的最高。4.在基因型的影响方面,本研究所参试的12份材料在设计的8个培养基中,都获得了胚状体,但胚状体诱导率差异很大(0.75%~19.03%)。5.在活性碳的影响方面,本试验对添加0、0.05%、0.25%、0.5%活性炭的培养基胚状体诱导情况进行了比较,结果显示,活性炭可以有效控制花药褐化和愈伤程度,但花药在高浓度的活性炭(0.25%,0.5%)培养基中会出现死亡现象;0.05%的活性炭培养基可以有效地提高参试材料的胚状体发生,在活性炭浓度为0.5%的培养基花药胚状体诱导率显著下降。6.本研究对3个供试材料的胚状体形态进行了观察,发现并不是所有的胚状体都能生长成正常的植株,3个材料胚状体的成苗率在39.1~45.3%,都很低。进一步观察发现,胚状体在发育过程中会出现四种形态:成熟胚状体、无生长点胚状体、根毛状胚状体、停止发育的胚状体,在这四类胚状体中,只有成熟胚状体和无生长点胚状体可发育成正常植株,根毛状胚状体和停止发育的胚状体则无法成苗,这是造成胚状体成苗率较低的直接原因。
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