杀念菌素高产菌株的构建

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杀念菌素是一种具有广谱抗真菌活性的七烯大环内酯类抗生素,产生于链霉菌FR—008(Streptomyces sp.FR—008)或灰色链霉菌IMRU3570(Streptomyces griseus IMRU3570)。本文以链霉菌FR—008的突变株ZYJ—6作为出发菌株,通过基因工程技术引入农业生物药物模型基因,如引入全局性正调节基因adpAc、前体物合成基因S—腺苷甲硫氨酸合成酶基因metK、透明颤菌血红蛋白基因vgb和敲除广泛性的抑制基因nsdA,研究了各个基因分别对杀念菌素合成的影响。结果表明:天蓝色链霉菌中的adpA基因与metK基因在ZYJ—6中高效表达使杀念菌素的产量分别提高了10%和40%;vgb基因的异源表达可以促进细胞的生长且杀念菌素的合成量提高了30%; nsdA基因的敲除对杀念菌素的合成没有影响。在此基础上又分析了两两基因整合对该抗真菌素产量的影响,结果在ZYJ—6引入metK,vgb整合基因或metK,adpA整合基因都可以进一步提高杀念菌素的合成量,与出发菌株相比,杀念菌素产量都提高了40%。根据上述结果,我们又构建了metK,vgb,adpA三个基因的整合表达载体,同时采用“核糖体工程技术”进行链霉素、庆大霉素和利福霉素等的抗性突变株的筛选,获得了一株杀念菌素产量进一步提高了40%的链霉素抗性突变株STR—4。最终将metK,vgb,adpA整合基因在链霉素抗性突变株STR—4中进行高效表达,获得了能使杀念菌素产量提高了110%的高产菌株。本研究对于进一步建立高效表达农业生物药物的通用宿主系统,提高其他抗生素的异源表达量具有重要意义。
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