蜜环菌(Armillaria mellea)具有很高的生态经济利用价值,是名贵药用中药材天麻的一种共生真菌,天麻的生长发育必须充分依靠蜜环菌为其生长提供所需的营养。蜜环菌因使用时间的增加,加上天麻种植户和菌种生产商的培养管理不当,使得菌种循环使用发生了严重功能退化等不良的现象,寻找和获得具有优势性的蜜环菌已经成为我国天麻产业努力的目标之一。本试验主要通过以下几个方面的科学研究,筛选研制出优良蜜环菌菌株用于天麻生产。第一,通过对七株蜜环菌的分子鉴定,确定七株蜜环菌之间的科学分类关系地位及其亲缘关系;第二,为解决上述问题,本研究通过对七株蜜环菌的生长条件进行筛选,探索七株蜜环菌的生长特点,筛选出适宜蜜环菌生长的优良条件。第三,将七株蜜环菌与三种类型天麻进行拌栽试验,即与天麻的适应性研究,筛选出与不同类型天麻适应性高的菌株。综合以上试验结果,为筛选栽培天麻的优质蜜环菌菌种提供一定理论依据和技术支持。本试验的主要研究成果如下:1.对七株蜜环菌的生物种分子鉴定。通过试验提取了七株蜜环菌的DNA,进行r DNA-ITS和r DNA-TEF序列扩增,构建系统进化树,对七株蜜环菌进行物种鉴定及亲缘关系分类的分析。1、2、3、4、5号菌株与Armillaria aotearoa(NZFS 242),Armillaria altimontana(Mac4),Armillaria calvescens(ST18),Armillaria gallica(M70)and Armillaria nabsnona(HKAS85523)聚集在一起,形成一族。1、2、4、5号菌株之间存在着密切的系统发育关系,而3号菌株只具有ITS基因,需要比较它们之间的碱基和形态特征差异,以确定它们的种。6号和7号菌株与Armillaria mellea(AFTOL-ID 449)、Armillaria mexicana(MEX88)聚集在一起,其中6号菌株与Armillaria mellea(AFTOL-ID 449)形成了一个具良好分枝(70%)的姐妹系。2.采用单因素试验的考察方法,以菌索生物量为综合考察的主要指标,对七株蜜环菌的生长条件进行筛选。试验研究结果显示:蜜环菌对葡萄糖的综合利用率最好,添加葡萄糖为碳源的培养基能有效促进蜜环菌的生长,且菌索的平均干重总体最高,而所有菌株对蔗糖的综合利用率均最差。添加蛋白胨、酵母浸膏和牛肉浸膏为氮源的培养基利于菌索的生长,其中蛋白胨的效果最佳,而添加硝酸钠的培养基则抑制蜜环菌生长。土豆培养基最适合用于蜜环菌菌种的生产。七株蜜环菌生长的适宜温度范围在15℃-25℃之间均可,暗培养环境下菌索生长较好,酸性条件菌索长势良好且粗壮,碱性条件抑制菌索生长且容易致死菌株。3.无论是采取有性繁殖还是无性繁殖的栽培方式,同一菌株与三种天麻拌栽的产量趋势基本一致,天麻的产量均表现为红天麻>绿天麻>乌天麻,且1号和5号菌株在与三种类型天麻拌栽后得到产量和数量较为稳定且效果较好。试验结果表明,6号和7号菌株在与天麻拌栽时易出现“空窝”现象,说明6号和7号菌株均不适合用于天麻的栽培生产。采用无性繁殖方式种植的天麻产量明显高于有性繁殖的栽培方式。4.通过测定天麻的有效成分,结果显示,无论是有性繁殖还是无性繁殖,所有菌株与三种类型天麻拌栽后的天麻水分含量和灰分含量均已达到《中国药典》(2015版)的规定。相同菌株与同一类型天麻拌栽时,天麻有效成分表现为无性繁殖栽培方式种植的天麻浸出物含量和多糖含量总体高于有性繁殖方式下种植的天麻,且天麻无性繁殖栽培方式下,所有菌株与三种类型天麻拌栽的浸出物含量均已达到《中国药典》(2015版)的规定,而有性繁殖栽培方式下有些菌株拌栽的天麻浸出物含量却没有达到《中国药典》(2015版)的规定。5.在两种栽培方式的对比下,使用无性繁殖的栽培方式种植天麻,既能提高和保证天麻的产量,品质又能远远的超过《中国药典》(2015版)对天麻含量的规定标准,不管是在产量还是品质上,无性繁殖的栽培方式都要优于有性繁殖的栽培方式。在有性繁殖方式下,七株蜜环菌与红天麻和乌天麻拌栽时,其天麻素和对羟基苯甲醇总量均高于对照菌株,而对照菌株与绿天麻拌栽时天麻素和对羟基苯甲醇总量最高。在无性繁殖栽培方式下,1号至7号蜜环菌菌株与红天麻拌栽的天麻素和对羟基苯甲醇总量均高于对照菌株;1号、2号、3号和5号菌株拌栽乌天麻的天麻素和对羟基苯甲醇总量均高于或等于对照菌株;1号和5号菌株拌栽绿天麻的天麻素和对羟基苯甲醇总量显著高于对照菌株。所以,1号和5号菌株不仅在产量和数量上表现稳定且良好,其药材质量也很高,天麻素和对羟基苯甲醇总量又能远远超过《中国药典》(2015版)的规定。