南蛇勒RIP的分离纯化及其抗肿瘤作用初步研究

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核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一类广泛存在于植物界的毒蛋白,能破坏核糖体的结构,从而可以抑制蛋白质的生物合成。研究表明,RIP在抗病毒、抗肿瘤、免疫调节及抗生育、抗虫害等方面显示出良好的生物学活性,在医学、农业方面已展现出诱人的应用前景。本研究以云南德宏州生长的豆目苏木科植物南蛇勒(Caesalpinia minax Hance)的种子为原料,运用硫酸铵分级沉淀、C-25阳离子交换、Sephadax-G75凝胶层析等方法分离提取、纯化得到了一种较高纯度的南蛇勒蛋白,所获得的蛋白经SDS-PAGE电泳检测呈单一条带,其分子量约为29.64KD,实验表明该蛋白具有RNAN—糖苷酶活性,具有抗肿瘤活性。综合各方面信息,我们认定分离纯化出了一种新来源的核糖体失活蛋白——南蛇勒RIP。由于一般RIP表现出抗肿瘤的生物活性,本实验中以小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)和宫颈癌细胞(Hela细胞)为研究对象进行体外生物活性实验。结果表明,南蛇勒RIP对B16细胞和Hela细胞的增殖有显著的抑制作用,且呈现出明显的量—效关系和时—效关系。(1)在研究南蛇勒RIP对细胞增殖抑制活性的量—效实验表明,随RIP浓度的增加,对细胞的增殖抑制作用明显加强。作用48小时,南蛇勒RIP对Hela细胞的半抑制浓度IC50约为145μg/ml,对B16细胞的半抑制浓度IC50约为136μg/ml。(2)在研究南蛇勒RIP对细胞增殖抑制活性的时—效实验表明,RIP的抑制细胞增殖的能力随时间的延长而增强,在150μg/ml浓度作用情况下,细胞的增殖几乎处于停顿,72小时时对Hela细胞的抑制率为85.61%,对B16细胞的抑制率为88.91%,其对B16细胞系的体外增殖抑制作用较对Hela细胞系的抑制作用略强。(3)初步研究了南蛇勒RIP对B16细胞粘附作用的影响。结果表明:RIP对B16细胞系对ECM各成分的粘附作用不是很明显,在150μg/ml浓度下除能够减少B16细胞对胶原蛋白Ⅰ的粘附外(抑制率约20%),其余在误差范围内,作用不明显。
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