大豆花叶病毒病(Soybean Mosaic Virus,SMV)是一种世界性大豆病毒病害,SMV侵染大豆以后,叶片呈花叶状,影响其光合作用,严重时会造成顶枯和坏死而导致整株植株死亡。每年,SMV会造成我国大豆减产15-30%,严重影响大豆的产量和品质。利用转基因技术快速培育对所有SMV株系均有抗性的优良品种,已经成为我国大豆抗病育种领域的重要任务。病毒外壳蛋白基因(Coatprotein,CP)是SMV病毒在植物体内进行病毒外壳合成的关键基因,如果干扰CP基因,可阻碍病毒在植物体内的复制,从而将病毒局限在植物体某一部位,达到控制病毒扩散的作用。本研究以Bar基因为抗性筛选基因,利用RNA干扰原理,采用GATEWAY技术成功将CP基因构建到干扰表达载体pB7GWIWG2(Ⅱ)中。PCR检测、酶切验证表明目的基因插入载体的大小、方向及目的基因插入载体的位置正确,CPi基因以反向重复形式取代两个ccdB位点与pB7GWIWG2(Ⅱ)成功组合并可形成发夹结构。本研究主要对农杆菌介导大豆子叶节方法中的关键环节进行了优化,包括种子灭菌方法、侵染菌液的活力以及浓度、侵染时间和共培养时间的筛选等等。结果表明:氯气灭菌法明显优于乙醇灭菌法,其平均萌发率为86.10%、平均污染率为7.37%;最佳菌液活力和侵染浓度的组合为菌液浓度(OD600nm)=0.8～1.0且侵染浓度(OD600nm)=0.6～0.8;最佳侵染时间和共培养时间分别为30 min和4 d。同时,通过对6个大豆栽培品种进行萌发率、GUS瞬时表达率、丛生芽诱导率的评价显示,HC-6的种子活力高、易被农杆菌侵染且具有高再生能力。在上述优化体系基础上,利用已经构建好的干扰表达载体pB7GWIWG2(Ⅱ)-CPi对HC-6进行转化,并采用PCR检测、除草剂涂抹检测和PAT/bar转基因检测试纸法对获得的T0代转基因植株进行检测。结果表明:目的基因已经成功整合进大豆栽培品种HC-6的基因组中,并在蛋白水平上得到表达。该转化体系的最高转化率可达3.76%,为通过农杆菌介导大豆子叶节遗传转化培育转基因大豆品种奠定了基础。