靶向Livin基因沉默对人结肠癌细胞株SW480生物学行为影响及作用机制的实验研究

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nanpingke11
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目的:Livin是凋亡抑制蛋白(inhibitors of apoptosis proteins,IAPs)中的一个最新成员,其主要在基因转录过程中发挥重要的作用。降低或消除Livin基因在肿瘤细胞中的过度表达,可解除Livin对肿瘤细胞凋亡的抑制作用,促进肿瘤细胞死亡和增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。RNA干扰(RNAi)能高效特异地调低目的基因的表达,并已广泛应用于肿瘤治疗的研究。本研究旨在采用RNA干扰技术转染结肠癌SW480细胞,观察其对人结肠癌细胞株SW480增殖凋亡的影响,并初步探讨Livin基因在结肠癌中的作用,为进一步研究结肠癌的耐药性及基因治疗奠定基础。方法:①设计并制备针对Livin基因的小干扰RNA序列,以脂质体(lipofectamineTM2000)为载体转染具有高侵袭潜能低分化人结肠癌细胞株SW480,流式细胞仪检测其转染效率,寻求SW480细胞株的最佳转染效率的条件;②将Livin-siRNA转染人结肠癌细胞株SW480,分别采用RT-PCR以及Western印迹检测转染后SW480细胞Livin和Caspase-3在mRNA和蛋白水平表达情况;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同时间段细胞增殖活性的变化,并绘制生长曲线。③采用流式细胞术(FCM)检测计算对照组和实验组细胞的吸光度值以及细胞周期,细胞凋亡的情况。结果:①细胞数约为每孔1.2×105个,siRNA为80pmol,Lipofectamine2000与siRNA比例为4ul:4ul(6孔板)时,具有较佳的转染效率(93.9%),继续提高siRNA浓度并不能明显提高转染效率;②转染Livin-siRNA后转染组Livin mRNA和蛋白表达明显下降,其差别具有统计学意义(p<0.05),显示出较佳的干扰效果;而Caspase-3mRNA的表达和蛋白的活性却得到增强,差别具有统计学意义(p<0.05)。③转染了Livin-siRNA的结肠癌细胞增殖能力下降,差别具有统计学意义(p<0.05),凋亡增加,差别具有统计学意义(p<0.05),但对其细胞周期未见明显影响,差别无统计学意义(p>0.05)。结论:①Livin-siRNA能有效沉默结肠癌细胞株SW480中Livin基因的过表达;②Livin基因通过Caspase蛋白酶水解途径来调控SW480细胞的生长;③Livin-siRNA转染可抑制结肠癌细胞株SW480的增殖并且能加速其凋亡,但可能不通过影响细胞周期来发挥作用。靶向RNAi干扰技术在结肠癌的基因治疗中具有潜在的价值,Livin可作为结肠癌基因治疗的新靶点。
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