【摘 要】
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本研究利用RT-PCR技术从籽鹅脑垂体RNA中成功扩增出FSHα、β亚基的基因序列,并进行克隆、测序和同源性分析。结果显示籽鹅FSHα亚基的基因序列由363bp组成,编码120个氨基酸组成的前体蛋白,其中前24个氨基酸为信号肽序列,成熟肽由96个氨基酸组成。FSHβ亚基的基因序列由396bp组成,编码由131个氨基酸组成的前体蛋白,前20个氨基酸为信号肽序列,成熟肽由111个氨基酸组成。将测序得到
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本研究利用RT-PCR技术从籽鹅脑垂体RNA中成功扩增出FSHα、β亚基的基因序列,并进行克隆、测序和同源性分析。结果显示籽鹅FSHα亚基的基因序列由363bp组成,编码120个氨基酸组成的前体蛋白,其中前24个氨基酸为信号肽序列,成熟肽由96个氨基酸组成。FSHβ亚基的基因序列由396bp组成,编码由131个氨基酸组成的前体蛋白,前20个氨基酸为信号肽序列,成熟肽由111个氨基酸组成。将测序得到的两亚基基因序列与NCBI上其它物种的相应序列进行同源性比对分析,发现在核酸水平和氨基酸水平上都具有较高的同源性,说明FSH在各种物种间具有高度保守性。将试验获得的籽鹅FSHα、β亚基基因登录到NCBI上,登录号分别为EU563911和EU563910。将克隆于pMD18-T质粒中的FSHβ亚基基因片段通过PCR扩增获得去除编码信号肽区的cDNA ,经NcoI和HindⅢ酶切后插入到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达载体pET-32a-FSHβ。将此重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）中,用IPTG进行诱导表达,通过对重组大肠杆菌菌体的超声波裂解物的SDS–PAGE电泳分析及Western blotting鉴定。结果表明重组菌能表达融合蛋白形式的FSHβ,分子量约为32kDa,与预期大小一致。本研究获得了籽鹅FSH两个亚基的基因序列,并构建了FSHβ亚基原核表达质粒,并且该基因在大肠杆菌中得到高效表达,为籽鹅FSH的进一步深入研究奠定基础。
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