肿瘤的发生和发展涉及到调控细胞增殖、衰老、凋亡、信号传导等多种基因的相互作用，所以多靶点进攻肿瘤基因、多途径用药可能会更有效的治疗疾病。本课题旨在研究多种基因靶向的反义寡核苷酸(ASODN)联用以及反义寡核苷酸与化疗药物联用对抑制肿瘤生长的作用，初步建立了筛选、分析反义寡核苷酸药物组合靶标的实验方法及统计学方法。第一部分反义寡核苷酸抗肿瘤组合药靶的筛选主要围绕以下几方面进行：选择涉及细胞增殖、衰老、凋亡及信号传导通路的重要基因靶标：IGF-1R、hTERT、PKC-α、BCL-2及Survivin，以它们的mRNA为靶点，设计、合成5种反义寡核苷酸；分别进行两药组合及三药组合，以脂质体介导进行转染，用MTT法染色并计算细胞生长抑制率；通过析因设计、方差分析、金正均Q值法、聚类分析筛选出了组合作用较好的ASODN(hTERT)与ASODN(PKC-α)联合用药组及ASODN(IGF-1R)、ASODN(hTERT)与ASODN(PKC-α)联合用药组。第二部分反义寡核苷酸抗肿瘤组合药靶的作用机理研究是选择细胞实验筛选出的“组合药靶”，通过Western Blot、RT-PCR实验及对分子相互作用通路的分析，提示IGF-1R位于PKC-α的上游、PKC-α位于hTERT的上游起正向调控作用。第三部分研究的是靶向人端粒酶逆转录酶hTERT的反义寡核苷酸“癌泰得”分别与化疗药物顺铂、5-氟尿嘧啶、阿霉素联用抑制肿瘤细胞的增殖，用MTT法染色并计算联合用药对肿瘤细胞增殖的抑制率，通过对抑制率进行方差分析、Q值分析，可得出癌泰得与三种化疗药物联用都有一定的协同作用，其中癌泰得与顺铂的协同作用最为明显。对荷瘤裸鼠的实验也进一步证明了癌泰得与顺铂联用可以起到抑制肿瘤生长的增敏作用，同时联合用药并未增加对裸鼠的毒副作用。本研究提示：反义寡核苷酸联合用药可以抑制多个与肿瘤发生发展密切相关的基因，提高对肿瘤细胞增殖的抑制效果；反义寡核苷酸与化疗药物联用对抑制肿瘤细胞的生长也有明显的增敏作用。本研究为进一步筛选、分析反义寡核苷酸组合靶标提供了一定的实验基础和理论基础。