珠子参多糖提取及抗肝癌作用的实验研究

来源 :三峡大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zoxn2008
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目的:观察珠子参多糖(panax japlcus var polysaccharide,PJPS)对小鼠H22肝癌移植瘤生长的抑制效应及其机制。 方法:水提醇沉法提取珠子参粗多糖,经活性炭脱色、链霉蛋白酶-Sevag法除蛋白、透析袋去除小分子杂质后得到珠子参精制糖。60只18~20gBALB/c小鼠右前腋下接种腹水型H22瘤株,建立肝癌移植实体瘤模型。将小鼠随机分为6组,即生理盐水组(normal saline,NS)(阴性对照),5-氟尿嘧啶组(5-fluorouracil,5-FU)(阳性对照)、人参多糖组(ginseng polysaccharide,GPS)(阳性对照)、珠子参水煎液组(panax japlcus var,PJ)(阳性对照),珠子参多糖高、低浓度组。实体瘤模型连续给药11天后眼球取血处死小鼠。取小鼠肿瘤组织并称重,计算各用药组抑瘤率;对肿瘤组织进行HE染色,光镜下观察肿瘤细胞形态学特征;肿瘤组织按电镜标本处理后观察肿瘤细胞超微结构形态;机械法制取肿瘤细胞悬液,流式细胞仪(flow cytometer,FCM)PI染色法检测肿瘤细胞DNA含量并进行周期分析,计算凋亡率;剥离小鼠胸腺及脾脏并称重,计算各用药组胸腺指数及脾指数;机械法制取脾细胞悬液,FCM检测小鼠脾脏中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴细胞数量并计算CD4+/CD8+值;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠外周血血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)含量;另取18~20gBALB/c小鼠60只,于腹腔内接种H22细胞悬液建立腹水瘤模型,分组与给药方式同实体瘤模型,记录小鼠生存天数并计算生命延长率。 结果:在实体瘤模型中:珠子参多糖组的瘤重低于阴性对照组而高于5-FU组(P<0.01),与人参多糖组、珠子参水煎液组相比差异无统计学意义。珠子参多糖低浓度组体内抑瘤率为34.44%,高浓度组为36.19%;光镜下观察珠子参多糖组部分肿瘤细胞有坏死现象,但不如阴性对照组明显;电镜下可见珠子参多糖组肿瘤细胞出现凋亡学形态变化;珠子参多糖组胸腺指数及脾指数高于阴性对照组(P<0.05),也高于5-FU组(P<0.01),与珠子参水煎液组及人参多糖组相比差异无统计学意义;FCM检测肿瘤细胞周期显示,珠子参多糖组G0/G1期比例高于阴性对照组(P<0.05),S期细胞比例低于阴性对照组(P<0.05)而高于5-FU组(P<0.05),珠子参多糖高浓度组肿瘤细胞凋亡率高于阴性对照组而低于5-FU组(P<0.05);珠子参多糖组小鼠脾脏中CD4+T细胞比例及CD4+/CD8+高于阴性对照组(P<0.05),也高于5-FU组(P<0.01),与珠子参水煎液组及人参多糖组相比差异无统计学意义;珠子参多糖组外周血VEGF浓度低于阴性对照而高于5-FU组(P<0.01),与珠子参水煎液组及人参多糖组相比差异无统计学意义;在腹水瘤模型中:珠子参多糖组小鼠生存期高于阴性对照组(P<0.05),其生命延长率高浓度组为34.64%,低浓度组为35.22%。此外在本课题研究中珠子参多糖高、低浓度组之间所测指标均未显示出统计学差异。 结论:珠子参多糖对H22肝癌小鼠具有抑制肿瘤生长、延长生存期的作用。其机制可能与提高荷瘤小鼠机体免疫功能,干扰肿瘤细胞周期,降低VEGF的表达有关。
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