论文部分内容阅读
目的：检测经前期综合征肝气郁证模型大鼠海马、额区、下丘脑、杏仁核这四个脑区内5-羟色胺2C受体（5-HTR2C）分布表达及海马PLCβ、DAG、IP3、PKC蛋白活性的变化，初步探讨PMS肝气郁证发病的中枢机制，并阐明舒郁胶囊治疗肝气郁证的干预机制。方法：1.通过阴道涂片和旷场实验筛选动情周期规律的健康Wistar大鼠纳入实验，采用情志刺激为主多因素造模法制备PMS肝气郁证大鼠模型，大鼠体重、旷场实验和肾上腺系数进行模型评价。2.免疫荧光技术检测5-HTR2C在正常对照组、肝气郁证模型组、舒郁给药组、氟西汀给药组大鼠海马、额区、下丘脑、杏仁核中的分布， Western blot检测海马、额区、下丘脑、杏仁核中的5-HTR2C的蛋白表达水平，观察舒郁胶囊对5-HTR2C表达水平的调节作用。3. ELISA和Western blot方法检测正常对照组，假手术对照组，肝气郁证模型组，舒郁给药组，氟西汀给药组，激动剂组大鼠海马中PLCβ水平、DAG/IP3的浓度、PKC水平的变化，阐明舒郁胶囊对5-HTR2C介导的下游信号通路中PLCβ、DAG、IP3、PKC的调节作用结果：1.造模结束后大鼠宏观结果比较：与正常组大鼠相比，模型组大鼠体重明显下降（P<0.01）；与模型组相比，舒郁胶囊组和氟西汀组体重明显增加（P<0.01）；与正常组相比，肝气郁模型组大鼠反应迟钝，活动减少，旷场水平、垂直，总分均明显降低（P<0.05或者P<0.01）；与模型组相比,舒郁组和氟西汀组给药治疗后反应敏感，活动增加，大鼠旷场水平、垂直、总分均显著升高（P<0.05或者P<0.01）。2.免疫荧光结果显示：与正常组大鼠相比，肝气郁模型组大鼠海马、额区、下丘脑、杏仁核中5-HTR2C受体细胞排列稀疏杂乱，分布没有发生变化，舒郁组和氟西汀组各脑区分布排列无异常。Western blot结果显示：与正常组相比，模型组大鼠海马、额区、下丘脑、杏仁核中显著降低（P<0.05或者P<0.01）；与模型组相比，舒郁组和氟西汀组相比，5-HTR2C表达水平明显上升（P<0.05或者P<0.01）。3. ELISA结果显示：与正常组大鼠相比，模型组大鼠海马中DAG、IP3含量显著降低；与模型组相比，激动剂组、舒郁组和氟西汀组DAG、IP3含量明显上升（P<0.05或者P<0.01）。Westernblot结果显示：与正常组大鼠相比，模型组大鼠海马中PLCβ表达、PKC活性显著降低（P<0.05或者P<0.01）；与模型组相比，激动剂组、舒郁组和氟西汀组PLCβ表达、PKC活性明显升高（P<0.05或者P<0.01）结论：通过慢性束缚应激为主的多因素造模法成功复制经前期综合征肝气郁证大鼠动物模型；PMS肝气郁证的发生可能与大鼠海马、额区、下丘脑、杏仁核中5-HTR2C表达及海马中PLCβ、DAG、IP3、PKC的活性异常降低有关；舒郁胶囊可以有效纠正海马、额区、下丘脑、杏仁核中5-HTR2C表达及海马中PLCβ、DAG、IP3、PKC的活性降低的状态，这可能是舒郁胶囊治疗PMS肝气郁证的中枢机制之一。