目的：癫痫是大脑神经元异常放电引起以短暂脑功能失常为特征的脑部疾病，口服抗癫痫药（AEDs）为目前临床治疗的主要方式。近年动物实验证实，AEDs在抑制癫痫同时，可通过多种途径影响脑发育过程中神经细胞增生、迁移与分化，突触形成与可塑性及神经纤维髓鞘形成，增加神经细胞凋亡[1-2]。苯妥英钠（Phenytoin Sodium, PHT）系二苯乙内酰脲钠盐，是传统AEDs，常作为抗癫痫大发作的首选药物。由于临床应用广泛，有研究显示其抗癫痫外的临床新用，如促进创面愈合、治疗偏头痛、眩晕、呃逆、幻听、心肌梗死及硬皮病等[3]。但由于PHT治疗窗窄，个体差异大，服药期长，极易发生急、慢性中毒。该药不良反应（ADR）报道屡见不鲜，涉及多个系统，如中枢神经系统（CNS）、皮肤、血液系统、消化系统、心血管和内分泌系统等，CNS损害主要表现为小脑前庭功能损害、认知功能障碍、锥体外系功能异常等[4]。本课题通过研究PHT与正常成年大鼠顶叶、海马神经细胞凋亡的相关性，用原位缺口末端标记技术（TUNEL法）检测细胞凋亡，并用免疫组化法检测顶叶、海马神经细胞Fas和caspase-3表达的变化，从动物实验角度判断不良反应与细胞凋亡及Fas和caspase-3表达的关系。方法：1分组及药物干预：清洁级健康雄性10周龄Sprague-Dawley（SD）大鼠30只（体重200±20g）。按随机分组原则将大鼠平均分为6组，每组5只。低/高剂量组每日总剂量按成人单位体重治疗/中毒剂量的25倍计算,采用自制灌胃针进行灌胃，分组如下：A1组：生理盐水短疗程组，生理盐水以2ml/100g/d给大鼠灌胃15天；A2组：生理盐水长疗程组，生理盐水以2ml/100g/d给大鼠灌胃30天；B1组：低量PHT短疗程组，PHT100mg/kg/d溶于生理盐水（2ml/100g）给大鼠灌胃15天；B2组：低量PHT长疗程组，PHT100mg/kg/d溶于生理盐水（2ml/100g）给大鼠灌胃30天；C1组：高量PHT短疗程组，PHT200mg/kg/d溶于生理盐水（2ml/100g）给大鼠灌胃15天；C2组：高量PHT长疗程组，PHT200mg/kg/d溶于生理盐水（2ml/100g）给大鼠灌胃30天；2动物取材：取大鼠以10%水合氯醛深度麻醉，生理盐水、4%多聚甲醛自左心室灌注、固定，剥取大鼠脑组织，放入4%多聚甲醛中后固定，制作石蜡包埋，常规切块（片厚5μm）行凋亡检测及免疫组化。3凋亡检测：用原位末端标记法（TUNEL法）检测标本内凋亡细胞，免疫组化法检测标本内凋亡相关基因Fas及caspase-3的表达。光镜观察各组脑片顶叶、海马凋亡细胞形态、数量的改变。4统计方法：应用SPSS13.0统计软件行方差分析，P<0.05为差异有统计学意义，多组间均数用One-Way ANOVA检验比较，各组均数间用SNK检验两两比较。利用直线相关分析法分析Fas和caspase-3表达是否存在相关关系。结果：1药物干预后各组顶叶神经元凋亡情况：1.1TUNEL检测结果：正常对照组偶见凋亡细胞，各PHT组均可见散在稀疏的TUNEL阳性细胞。各组间均数两两比较P>0.05，差异无统计学意义。1.2凋亡相关基因Fas及caspase-3的表达：各组标本中Fas及caspase-3均有少量表达，为胞核、胞浆着棕色。统计表达阳性细胞平均光密度（AO）值，各组间均数两两比较P>0.05，差异无统计学意义。2药物干预后各组海马神经元凋亡情况：2.1TUNEL检测结果：正常对照组偶见凋亡细胞，各PHT组均见凋亡细胞数目增多，且不同剂量及不同用药时间之间均有明显差异。2.2凋亡相关基因Fas及caspase-3的表达：低剂量PHT短疗程、长疗程组海马神经元Fas、caspase-3阳性细胞较正常对照组增多，阳性细胞着色和密度均增强，统计表达阳性细胞AO值，用药时间两组间存在明显差异；高剂量PHT短疗程、长疗程组海马神经元Fas、caspase-3阳性细胞较低剂量组增多，阳性细胞着色和密度均增强，统计表达阳性细胞AO值，用药时间两组间存在明显差异。2.3Fas、caspase-3表达的关系：各组海马区域内Fas与caspase-3表达呈正相关。结论：1PHT在不同剂量及疗程下，对正常成年大鼠顶叶皮层神经元的凋亡及Fas、caspase-3表达无明显影响。2PHT在低剂量和高剂量组的15d及30d疗程中均可影响海马神经凋亡，Fas、caspase-3表达增多，在高剂量和长疗程时影响更显著，并且Fas与caspase-3的表达呈正相关。3提示PHT引起海马神经元凋亡的机制可能是通过增加Fas表达启动外源性途径激活caspase-3引起凋亡。