微波消融原位瘤苗联合调节性T细胞清除对小鼠抗肝癌免疫的影响

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目的:研究微波消融原位瘤苗联合调节性T细胞清除对小鼠抗肝癌免疫的影响。方法:通过小鼠皮下注射Hepa1-6肝癌细胞建立小鼠皮下肝癌模型,将小鼠分为单纯消融组(MWA组)、消融联合细胞因子缓释微球组(ISV组)、消融联合调节性T细胞清除组(MWA+Treg depletion组)、消融联合细胞因子缓释微球及调节性T细胞清除组(ISV+Treg depletion组)4组,对各组进行相应干预,待肿瘤消退1个月后在对侧皮下再次接种等量Hepa1-6肝癌细胞再刺激,2周后取小鼠外周血,分离单核细胞行流式细胞术检测CD4+T细胞和调节性T细胞在外周血淋巴细胞中所占比例的变化。取小鼠脾脏行免疫组化检测CD8+T细胞及调节性T细胞数量的变化,分离脾脏淋巴细胞与灭活的Hepa1-6细胞共培养,ELISPOT法检测淋巴细胞分泌INF-γ的情况。   结果:流式细胞术检测小鼠外周血CD4+T细胞占淋巴细胞比例,MWA组占12.50%,ISV组占13.30%,MWA+Treg depletion组占16.65%,ISV+Tregdepletion组占24.22%。调节性T细胞占淋巴细胞比例,MWA组占2.50%,ISV组占2.37%,MWA+Treg depletion组占2.24%,ISV+Treg depletion组占1.83%。免疫组化观察各组脾脏中调节性T细胞数量,ISV+Treg depletion组调节性T细胞数量少于ISV组及MWA+Treg depletion组,ISV组及MWA+Treg depletion组调节性T细胞明显少于MWA组;脾脏CD8+T细胞数量ISV+Treg depletion组高于其他三组,MWA组数量最少。ELISOT检测INF-γ分泌:ISV+Treg depletion组为292 IFN-γSFCs/106;MWA+Treg depletion组为55 IFN-γSFCs/106;ISV组为30 IFN-γSFCs/106;MWA组为18IFN-γSFCs/106。ISV+Treg depletion组IFN-γ分泌要多于MWA+Treg depletion组(P<0.05),ISV组(P<0.05)及MWA组(P<0.05)。MWA+Treg depletion组IFN-γ分泌多于ISV组(P<0.05)及MWA组(P<0.05)。ISV组IFN-γ分泌多于MWA组(P<0.05)。   结论:微波消融原位瘤苗联合全身调节性T淋巴细胞清除可有效减少调节性T细胞数量,促进淋巴细胞INF-γ的释放,增强小鼠的抗肝癌免疫。
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