人类二羰基/L-木酮糖还原酶在肝细胞癌中的临床意义

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引言:肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其发病率居第五位,死亡率位列第三位,并且目前我国是肝癌发病人数约占世界的55%,其中90%以上肝癌是肝细胞性肝癌HCC。世界卫生组织指出,每年1200万人被诊断癌症中有五分之二是可以预防的。因此,寻找和鉴定肝癌相关基因并研究它们的生物学功能,将有助于揭示肝癌的发生机制并指导临床诊断和治疗。DCXR(二羰基/L一木酮糖还原酶)在糖代谢、解毒、细胞黏附等方面有重要作用,在多数肝癌组织中显著下调,表示其有作为HCC肝细胞性肝癌的有效生物标志物的可能。我们主要是对DCXR基因在HCC中表达及差异表达的机制进一步研究,并探讨其作为生物分子标志物的可能。方法:RT-PCR筛选伴发肝癌病人癌组织相较癌旁组织的差异基因DCXR,利用G0分析对DCXR功能分析。收集其生物信息学分析的研究状况。qPCR定量分析mRNA水平的差异性表达程度,WB分析蛋白水平的DCXR差异性表达,经IHC分析其组织定位及蛋白水平差异性表达。统计学分析方法分析其作为肿瘤标志物的意义。细胞增殖实验及EMT相关基因分析其在肝癌发展中作用。结果:经RT-PCR筛选出了一例多发肿瘤病人的差异性基因,其中DCXR是观察到肿瘤组织相比癌旁组织表达下调了4倍。运用GO分析发现其是一种戊糖-葡萄糖醛酸转换途径代谢酶。IHC分析63例HCC组织样本,发现所有HCC组织中的DCXR的表达水平明显低于相应癌旁组织,同时PCR、WB技术发现和IHC共同显示mRNA水平和蛋白质水平的结果相一致,数据还显示下调的水平各异。扩大样本量对36例其他肝癌组织样本(ICC肝内胆管细胞癌13例、CA肝内胆管腺癌2例、肝门部胆管癌HPCA5例、CHO胆管癌4例、胆囊癌GBCl例、海绵状血管瘤HA1例、LM伴肝转移10例(分别是胃2例/结肠6例/小肠1例/肾1例))也进行了分析,同样发现所有的癌组织中表达水平显著低于相应癌旁组织。对收集的组织样本的临床资料进行分析,发现DCXR在癌中表达相关于血中的总胆红素(p<0.05),而且IHC发现DCXR高表达于非癌细胞,并且常表达在上皮细胞。为验证DCXR能够作为生物标志物,我们对收集的样本进行敏感性及特异性分析,发现HCC中其敏感性和特异性分别为67.1%和72.4%,ROC曲线值为0.763。这些结果增加了DCXR在肝癌HCC中作为有效肿瘤标志物的证据。而对其预后相关因素进行分析,不能发现任何相关性,除了上述的与总胆红素的相关性。并且在HCC中的总胆红素值变化与其他肝癌的总胆红素值变化间情况分析,虽然是均有正常范围和超出正常范围,但是发现DCXR在关于HCC超出总胆红素正常范围中的差异性变化更加明显。在肝癌细胞中利用基因敲除/过表达手段及细胞增殖实验证实了过表达DCXR抑制细胞的增殖,并且发现EMT相关基因fibronectin、 vimentin、snail及slug的变化明显。这些结果说明DCXR在肝癌发展中起着负性作用。但是通过去甲基化药物5-Aza-dC活化抑制基因DCXR分析,并无预期结果。结论:我们的研究表明,DCXR是在肝癌中表达显著下调,定位于表皮细胞。它们较好的敏感性和特异性进一步说明它们有作为HCC肿瘤标志物可能,而在与预后相关因素分析时,发现其与总胆红素相关,未发现其与肿瘤特性方面相关。其可促进细胞增殖,并可能经EMT方式对肝癌发展起到负性调节。这些进展性的研究结果提示,肝癌尤其HCC中的DCXR的表达差异性可作为临床的生物标志物的可能。
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