【摘 要】
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目的:通过构造骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell,BMSCs)体外衰老模型,研究抗坏血酸在延缓BMSCs衰老中的具体作用以及潜在的分子机制。方法:1.选取7日龄SD
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目的:通过构造骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell,BMSCs)体外衰老模型,研究抗坏血酸在延缓BMSCs衰老中的具体作用以及潜在的分子机制。方法:1.选取7日龄SD大鼠,在无菌条件下完全分离出胫骨和腓骨,并抽取其中的骨髓,再利用全骨髓贴壁培养法在体外分离培养出BMSCs。2.利用D-半乳糖与BMSCs共培养,诱导BMSCs衰老,试图建立BMSCs体外衰老模型。3.将抗坏血酸与衰老的BMSCs共培养,利用SA-β-Gal试剂盒染色检测分析抗坏血酸作用于衰老BMSCs后SA-β-Gal染色阳性率的变化,利用免疫荧光显微镜检测抗坏血酸作用于衰老BMSCs后细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)含量的变化,利用Western blot法分析衰老相关蛋白p16INK4a的变化并研究BMSCs衰老中相关信号通路蛋白的变化。4.联用AKT抑制剂与抗坏血酸进一步验证AKT/mTOR信号通路在抗坏血酸抑制细胞衰老中的作用。结果:D-半乳糖能诱导BMSCs衰老,衰老的BMSCs中ROS含量增多。抗坏血酸减少了衰老MSCs中的衰老细胞产生,降低了衰老MSCs内ROS水平,降低了衰老相关蛋白p16INK4a含量,并且影响了 AKT/mTOR通路的变化。而联用AKT抑制剂可以增加了抗坏血酸的作用效果。结论:抗坏血酸能够通过抑制细胞内ROS累积延缓BMSCs衰老,而AKT/mTOR信号通路参与了这一过程。
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