女贞子中苯乙醇苷类成分提取纯化及酸水解工艺研究

来源 :湖南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:suifengangle
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目的:女贞子,是木犀科植物女贞(Ligustrum lucidum Ait.)的干燥成熟果实。在我国资源丰富,分布广泛。作为一味传统中药,女贞子不仅在临床上应用广泛,而且在保健品、饮料、化妆品等领域也有应用。女贞子含有多种活性成分,其中苯乙醇苷类成分具有抗氧化、抗疲劳、抗炎、抗肿瘤、保护心血管系统、保护神经系统等作用,与女贞子药理作用密切相关。然而当前国内外对女贞子中苯乙醇苷类成分研究较少,其药效物质基础不够明确,为促进女贞子资源开发利用,本文在建立女贞子HPLC含量测定方法,考察最佳产地采收期的基础上,探究其中苯乙醇苷类成分提取纯化酸水解工艺。方法:(1)以酪醇、红景天苷、特女贞苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷为指标成分,进行方法学考察,建立女贞子苯乙醇苷类成分HPLC含量测定方法。(2)采用HPLC测定21批不同产地女贞子中5种苯乙醇苷类成分含量,运用聚类分析和主成分分析比较不同产地差异,确定最佳产地。测定种植于湖南中医药大学校园内7-12月女贞子中指标成分的含量,并考察各月女贞子的百粒重,确定最佳采收期。(3)以乙醇为溶剂,运用回流提取方法提取女贞子苯乙醇苷类成分。采用单因素实验考察乙醇浓度、溶剂倍数、提取时间、提取次数对得率的影响。在此基础上采用响应面分析法,以5种苯乙醇苷总含量为响应值,优化女贞子苯乙醇苷提取工艺条件。(4)利用大孔树脂富集纯化女贞子粗提液中苯乙醇苷类化合物。通过对比12种不同型号大孔树脂吸附-解析附性能,筛选出合适的大孔树脂作为纯化实验的材料。然后对上样液浓度、上样量、洗脱剂浓度、洗脱剂用量进行考察,确定纯化工艺条件。(5)以酪醇和红景天苷总含量为指标探究女贞子酸水解工艺,通过单因素实验考察酸的种类、料液比、水解时间、水解温度对得率的影响。在此基础上进行三因素三水平的正交实验,优化水解工艺。使用H103大孔树脂对酪醇和红景天苷进行纯化,考察水解液上样量和洗脱量,确定女贞子酸水解工艺。结果:(1)HPLC含量测定方法为:使用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6×250mm,5μm),柱温40℃,以乙腈—0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱时间程序为:0~30min,4%乙腈;30~70min,4%~20%乙腈;70~80min,20%乙腈,80~90min,20%~4%乙腈,流速:1.0ml·min-1:检测波长:224nm(特女贞苷)、275nm(酪醇、红景天苷)、332nm(松果菊苷、毛蕊花糖苷)。(2)产地采收期考察结果为:直观分析表明浙江省缙云大源镇女贞子含量最高,湖南省永州市新田县含量最低。聚类分析将21个产地分为3类,其中第三类产地浙江省缙云大源镇女贞子品质较好,主成分综合评分显示湖南省郴州市安仁县、湖南省岳阳市、浙江省丽水市缙云大源镇女贞子品质较好。研究表明湖南中医药大学的女贞子在10月份开始成熟,12月份产量和含量均达到最高,12月可作为湖南中医药大学女贞子的最佳采收期。(3)提取工艺考察结果:最佳条件为39%乙醇,17倍溶剂用量,提取2.7h,5种成分总含量为2.0478%。(4)大孔树脂纯化考察结果:H103型大孔树脂作为纯化实验的材料。最优条件为:上样液浓度为26.0mg/ml,上样量为22BV,40%乙醇洗脱,洗脱剂用量为11BV。苯乙醇苷类成分总质量分数为42.37%,回收率为78.51%。(5)酸水解工艺考察结果:采用浓盐酸水解,酸与提取液比例为1:100,温度为100℃,水解时间为3h,指标成分得率为1.2688%。大孔树脂纯化最优条件为:水解液调至中性,上样量为22BV,40%乙醇洗脱,洗脱量为13BV,酪醇和红景天苷的总质量分数为15.57%。结论:本文以女贞子为研究对象,以5种苯乙醇苷含量为考察指标,所建立的高效液相色谱色谱方法简便、准确,可用于女贞子的含量测定。通过响应面法优化提取工艺,得到最佳条件,苯乙醇苷总含量可达2.0478%,与预测值接近,得率较高。通过大孔树脂富集纯化苯乙醇苷,质量分数达到42.37%,较纯化前提高了5倍多。通过酸水解工艺,得到酪醇与红景天苷总质量分数为15.57%,有效提高了女贞子中酪醇和红景天苷的量。本研究系统的探索了女贞子苯乙醇苷提取纯化、酸水解工艺,并考察了女贞子最佳产地采收期,为女贞子质量控制、资源开发开发利用奠定了基础。
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