鳞翅目昆虫细胞系的DNA指纹图谱法鉴定及对SfaMNPV敏感性的测定

来源 :华中师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lm198505050056
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
细胞系的生物学特性研究对于细胞库的建立和生物制药是非常重要的,细胞系特性提供了细胞系家系的特点,形态特征,生化特征,遗传稳定性以及细胞系交叉污染的相关信息。细胞系的鉴定方法包括细胞特异性指标的分析。昆虫细胞系广泛应用于昆虫病毒培养和重组蛋白生产的科学研究以及工业生产,与哺乳动物细胞系相比,昆虫细胞系被报道交叉污染和错误标记的例子更多。本论文作者主要通过DNA指纹图谱技术鉴定17种鳞翅目昆虫细胞系并检测这些细胞系对芹菜夜蛾核型多角体病毒的敏感性。DNA指纹图谱是通过使用随机引物进行DNA扩增技术获得的,指纹图形是细胞系的一个稳定性参数。根据醛缩酶(aldolase),催乳素受体(prolactin receptor)和白细胞介素-1β(interlukin-1β)三个不同基因,设计三组不同的引物,从细胞中提取DNA,分别以每一种细胞系DNA为模板,PCR扩增,PCR产物琼脂塘凝胶电泳检测,从而获得完整的DNA指纹图谱。实验结果显示,除棉铃虫建立的BCIRL-HA-AMI产生了和甜菜夜蛾(Le-H-HNU7)一样的DNA指纹图形外,所有的细胞系都产生不同的DNA指纹图谱,它们可以彼此区分。BCIRL-HA-AMI和Le-H-HNU7的一致性图谱,可能是标记错误或交叉污染造成的;对Bt晶体毒素敏感的粉纹夜蛾BTI-TN581-4(TnH5-S)细胞和TnH5-R抗性细胞系的DNA指纹图谱是有差异的。本文作者使用TCLD50法测定了六种细胞系对芹菜夜蛾核型多角体病毒的敏感性。用梯度稀释的病毒悬浮液(SfaMNPV)接种培养于96孔细胞培养板中的粉纹也蛾BTI-TN5B1-4(TnH5-S),草地夜蛾Sf9,斜纹夜蛾(SL-ZSU-1),小菜蛾BCIRL-PX2-HNU3,舞毒蛾IPLB-Ld652和美洲棉铃虫(BCIRL-Hz-AMI)细胞,27℃孵育,逐日记录阳性感染数。数据用按Reed-Muench法分析,得到了不同细胞感染的病毒滴度。病毒感染Sf9细胞得到的病毒滴度是5×107 TCID50/ml,BTI-TN5B1-4(TnH5-S)细胞病毒滴度是3.2×107 TCID50/ml。在SL-ZSU-1,BCIRL-HZ-AMI,IPLB-Ld652和BCIRL-PX2-HNU3细胞中没有被检测除病毒粒子或病毒多角包涵体。
其他文献
目前我国经济飞速发展,为缓解现在的用水与交通压力,地下输水隧道与地铁势必会大大增加。伴随着隧道与地铁的建造,盾构始发时深施工竖井的稳定会成为一个重要难题,如果竖井结构不
玉米起源于南美洲高温多湿的热带地区,耐旱性较差。随着生态条件的恶化,干旱已成为许多国家和地区影响玉米生产最主要的非生物因素之一。而选育推广耐旱品种是减少干旱损失最有效、最经济的途径。但目前玉米种质资源狭窄、特别是耐旱资源的贫乏成为玉米育种的瓶颈。因此,扩充种质资源、创新种质材料,特别是优质抗逆材料的创新与利用在玉米育种中占有重要地位。谷胱甘肽硫转移酶(Glutathione S-transfera
学位
研究对信阳地区实时降雨数据进行了计算分析,根据信阳市住宅小区雨水利用的基本情况,综合考虑丰平枯典型水平年的产汇流效果,基于SWMM暴雨径流模型对小区的不同下垫面进行概
在目前风险度计算中,设计人员不仅希望获得结构体系的失效概率,还希望获得设计验算点。蒙特卡罗模拟法虽然精度高,但无法得到设计验算点;广泛采用的JC法需要对结构体系的极限状态
目的:手足裂畸形(split-hand/split-foot malformation,SHFM)是一种严重影响患者精细活动的先天性肢端畸形。我们收集到两个常染色体显性遗传中国人手足裂畸形家系,目的是鉴定这两