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黄曲霉(Aspergillus flavus)是一种对植物生长及人体健康有着重大危害作用的真菌。误食被黄曲霉污染的食物会出现发热、倦怠和厌食症、腹痛、呕吐、肝炎等慢性肝中毒的症状,长期便会引发肝癌。中国作为粮食生产的大国,所以研究在种植、贮存及运输中,预防黄曲霉污染带来的经济损失与食品安全等问题,具有重要的意义。实验室从南海海绵中筛选出多株黄曲霉拮抗菌株,本论文对其中拮抗活性最强的菌株CL展开研究,取得以下结果:从CL的培养特征、形态特征、生理生化和16S rDNA序列分析等方面对该细菌进行鉴定,确定其为芽孢杆菌属,与Bacillus velezensis strain YK50亲缘关系最近,达到99%,命名为Bacillus velezensis strain CL。用响应面分析法优化了Bacillus velezensis strain CL产抑菌活性物质的发酵条件,以单因素实验结果为依据进行P-B设计,确定了接种量、初始pH和培养温度为影响抑菌活性物质产量的主要因素;设计最陡爬坡实验确定最佳实验中心点;通过B-B实验,最终确定最适培养条件为:初始pH 5.5、接种量3%、培养温度24℃、80mL/250mL装液量,培养时间为96 h。优化的培养基为50 g/L葡萄糖、25 g/L酵母浸粉。在最优条件下,抑菌圈直径的预计值为3.23 cm,实际值达到3.2±0.13 cm,与推理值相符性达到96.23%,Bacillus velezensis strain CL产抑菌活性物质抑菌活性较原发酵培养基提高了52.38%。抑菌活性物质特性试验:温度稳定性:Bacillus velezensis strain CL所产抑菌活性物质在4℃与37℃处理时,其抑菌活性保持率可以达到90%以上,经-20℃处理其抑菌活性保持率明显降低,只有56%的抑菌活性,而经55℃处理后抑菌活性保持率降至38%,一旦超过80℃将完全丧失抑菌活性。pH稳定性:Bacillus velezensis strain CL的抑菌活性物质分别经pH2-8条件下都能保持稳定,其抑菌活性保持率都能达到85%以上,而在pH10的条件下处理10 h,其抑菌活性有所降低,降至56%。光辐射:Bacillus velezensis strain CL所产的抑菌活性物质在紫外稳定性并不强,当紫外照射剂量达到54 K,Bacillus velezensis strain CL抑菌活性保持率降低到32%;Bacillus velezensis strain CL的抑菌活性物质具有稳定的光照稳定性,在光照条件下照射10 d Bacillus velezensis strain CL的抑菌活性保持率始终保持在98%以上。遗传性能:Bacillus velezensis strain CL的遗传性能相当稳定,连续传8代其所产的抑黄曲霉菌的能力没有下降,其抑菌活性保持率始终在99%以上。Bacillus velezensis strain CL抑菌活性物质的组分分析,CL产的的抑菌活性物质为小分子蛋白类。通过透析法发现Bacillus velezensis strain CL产的的抑菌活性物质分子量大于2KDa小于3.5 KDa,对滤膜及超滤膜有很强的吸附性。Bacillus velezensis strain CL所产的抑菌活性物质可以抑制黄曲霉孢子的萌发。而且Bacillus velezensis strain CL基因组中含有的抑菌活性物质编码基因,扩增出3个基因序列分别为bamD、bacD与bacAB。其中bacD与bacAB基因编码的抑菌活性物质为bacilysin,bamD基因编码的抑菌活性物质是bacillomycin。