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γ分泌酶为介导阿尔茨海默氏病（AD）病理改变的关键酶之一。本文研究了转运膜蛋白21（TMP21）的γ分泌酶复合物组分的蛋白表达量及酶活性的影响。利用核糖核酸干扰和脱氧核糖核酸超表达二次转染技术（siRNA）干扰TMP21在敲除淀粉样前体蛋白表达基因的小鼠胚胎成纤维细胞系（MEF（KO））中的表达。实验选用空质粒载体为对照。处理转染组（T）和对照组（C）细胞,并收集纯化过程中含γ分泌酶复合物的样本:破碎细胞制备全膜蛋白（C1,T1）:选用CHAPSO进一步溶解后超速离心制备所得蛋白（C2,T2）;用γ分泌酶组分Presenilin-1（PS-1）的特异性抗体免疫沉降C2或T2制备IPC2和IPT2。Western blotting检测γ分泌酶复和物重要组分Nicastrin（NCT）,PS-1以及TMP21蛋白表达量;选用饱和浓度的γ分泌酶底物C99,运用ELISA检测Aβpeptide40和Aβpeptide42的生成总量。研究得到如下结果:1.取新生鼠脑,用CHO溶解hAPP751转基因鼠脑和PS1-/-细胞运用离心,恒温孵育等手段得到淀粉样蛋白前体-C末端片段（APP-CTF）,并运用免疫沉淀（IP）,凝胶过滤-高效液相色谱（Gel-HPLC）,反向高效液相色谱（PR-HPLC）,氨基酸序列分析和质谱（MS）法对APP-CTF的性质进行了研究。研究表明APP-CTF的膜外切割可能存在一种膜外双酶（γ分泌酶和ε分泌酶）切切割机制即可能存在α、β、γ以外的酶切新位点ε。2.分别用早老蛋白（PS）,Nicastrin（NCT）,前咽缺陷蛋白-1（APH-1）,早老蛋白增强子-2（PEN-2）免疫沉淀（IP）跨膜转运蛋白21（Transmembrane Protein21,TMP21）研究在鼠脑和HEK293细胞细胞系的表达差异。并进一步用蛋白质印迹法分析,结果表明TMP21可能与γ-分泌酶的组成成分Nicastrin（NCT）发生作用,对Aβ40和Aβ42的活性有抑制作用。但是具体的结合区域还是不清楚,有待于进一步的研究工作。3.本研究构建了TMP21的干扰载体,经检测干扰载体细胞模型构建成功。进行干扰载体检测时研究发现TMP21干扰后,对PS1复合物的影响较大,对Aβ40的产生有较大提高。4.经TMP21 siRNA处理MEF细胞后,所得样本T1,T2及IPT2所含TMP21的蛋白表达量较相应对照组样本C1,C2和IPC2下降14.8±2.1%,46.5±4.7%及68.9±3.4%,提示转染组MEF细胞中TMP21表达被成功干扰。而转染组和对照组中,构成γ分泌酶复合物的重要组分NCT与PS-1蛋白表达量无明显变化。同时,参照样本C1,C2及IPC2,样本T1,T2及IPT2中所含γ分泌酶活性分别升高13.9%（p=0.24）,87.2%（p＜0.001）,211.4%（p＜0.001）。5.经TMP21 cDNA处理MEF细胞后,所得样本T1,T2及IPT2所含TMP21的蛋白表达量较相应对照组样本C1,C2和IPC2上升16.9±2.1%,上升44.7±4.7%及64.5±3.4%,提示转染组MEF细胞中TMP21表达被成功超表达。而转染组和对照组中,构成γ分泌酶复合物的重要组分NCT与PS-1蛋白表达量无明显变化。同时,参照样本C1,C2及IPC2,样本T1,T2及IPT2中所含γ分泌酶活性分别下降11.6%（p=0.24）,85.1%（p＜0.001）,198.4%（p＜0.001）。6.有上述结论可以得出:TMP21可与PS-1共沉降,提示TMP21为γ分泌酶复合物的组分之一。MEF细胞中,在TMP21低蛋白表达状态下/高表达状态下,γ分泌酶活性升高/减低,且不影响其他组分的表达水平,提示TMP21为γ分泌酶的负调控因子之一。