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背景:胃癌是最具侵袭性的恶性肿瘤之一,是世界第五大最常见的恶性肿瘤。尽管在过去的几年中,胃癌在西方国家的发病率明显下降,但胃癌仍是全球癌症相关死亡的第二大原因。Ki67是一种与肿瘤细胞增殖紧密相关的核抗原。由于其高增殖性,Ki67被认为与蛋白标记指数相关。尽管Ki67被公认为是一个与癌细胞增殖和预后不良相关的关键标志物,但它在增殖方面的全部潜力尚未得到评估。鉴于Ki67在细胞增殖中的重要作用,Ki67被认为是癌症的潜在的治疗靶点。因此Ki67在胃癌发生发展过程中的作用机制非常值得我们深入研究。目的:探讨胃癌发生发展过程中Ki67可能的分子机制。方法:1)首先收集胃癌患者切除的肿瘤组织,通过免疫组化检测Ki67蛋白分别在胃癌组织和癌旁组织中的表达情况,统计学分析胃癌患者组织中Ki67蛋白的表达与患者临床病理特征之间的关系,以及生存分析;2)然后通过构建靶向为Ki67的CRISPR/Cas9慢病毒质粒下调4种胃癌细胞中Ki67的表达,利用qRT-PCR和免疫印迹、细胞增殖活性检测、流式细胞术检测细胞凋亡等实验,在体外研究了 Ki67对4种胃癌细胞的增殖、凋亡的影响。3)通过构建4荷瘤胃癌细胞的荷瘤小鼠,在体外研究了下调Ki67是否对4种胃癌细胞荷瘤小鼠体内移植瘤生长有抑制作用。4)通过qRT-PCR和免疫印迹实验分别在体内和体外研究了 Ki67与C-Myc和EGFR在胃癌的发生发展过程中的作用机制。结果:Ki67蛋白在胃癌患者组织中的表达阳性率显著高于其在癌旁组织中的表达(P<0.05)。在胃癌中,Ki67高表达与患者肿瘤直径、分化程度、浸润深度、淋巴浸润、临床分期均有显著相关性(P<0.05)。Kaplan-Meier预后分析显示胃癌患者中Ki67蛋白高表达组的总生存期(Overall survival,OS)明显低于Ki67蛋白低表达组,且Ki67蛋白的表达水平可作为一个独立的因素用于预测胃癌患者的预后(P<0.05);CCK8细胞毒性活性检测实验结果表明:和正常组人胃癌细胞系MKN45、N87、SGC、KATOIII细胞组相比,利用慢病毒敲除Ki67基因的以上4种胃癌细胞增值效率明显降低(p<0.05)。AnnexinV-APC单染法流式细胞仪检测细胞凋亡实验结果表明:和正常人胃癌细胞系MKN45、N87、SGC、KATOIII细胞相比,利用慢病毒敲除Ki67基因的以上4种胃癌细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。通过构建4荷瘤胃癌细胞的荷瘤小鼠,在体外研究了敲除Ki67是否对4种胃癌细胞荷瘤小鼠体内移植瘤生长有抑制作用。结果表明:接种12天后,和正常人胃癌细胞系MKN45、N87、SGC、KATOIII细胞组相比,利用慢病毒敲除Ki67基因的以上4种胃癌细胞荷瘤小鼠体内移植瘤生长被明显抑制(P<0.05)。在体外和体内研究中,qRT-PCR和Western blotting实验结果表明:在蛋白水平上,和正常组相比,敲除Ki67后4种胃癌细胞中Ki67和C-Myc以及Ki67和EGFR均相关联的明显下降(p<0.05)。在mRNA水平上,和正常组相比,敲除Ki67后4种胃癌细胞中C-Myc和EGFR均明显下降(p<0.05)。结论:1)与癌旁组织相比,Ki67蛋白在胃癌患者肿瘤组织中具有高表达。2)Ki67高表达与胃癌患者临床病理特征具有显著相关性。肿瘤较大、浸润较深,分化较低、淋巴侵犯以及临床分期较晚的胃癌患者Ki67蛋白的表达越高。3)Ki67蛋白的高表达与胃癌患者预后相关。Ki67蛋白高阳性表达组胃癌患者的中位生存期显著低于Ki67蛋白弱阳性和阴性表达组胃癌患者。4)敲除Ki67可降低4种人胃癌细胞的增殖,促进4种人胃癌细胞的凋亡,并抑制4种人胃癌荷瘤小鼠体内移植瘤生长。5)Ki67与C-Myc和EGFR具有关联性并且共同促进了胃癌的发生发展。