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蛋白饲料利用率低和肠道致病菌感染是影响养殖业发展的两大重要因素,而芽胞杆菌具有耐受恶劣环境、营养需求低、产酶丰富、抑菌广泛等独特优势,有望为养殖户提供解决问题、增收效益的有效工具——产蛋白酶芽胞杆菌益生菌。因此,本课题旨在筛选高产蛋白酶且拮抗肠道致病菌的芽胞杆菌,研究其酶学和抑菌性质、最适发酵条件以及活性影响因素,为后期应用提供基础理论依据。筛选到1株拮抗大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌,同时又水解蛋白的美丽短芽胞杆菌(Brevibacillus formosus)FJAT-10011。对该菌株发酵上清液中蛋白酶及抑菌物质的性质进行研究,结果表明:蛋白酶的最适反应温度和pH分别为40℃和pH6.0,在pH6.0～pH8.0、30～40℃的范围内,蛋白酶稳定性较高。抑菌物质具有较高的热稳定性,80℃处理30min后抑菌活性仅降低20%。抑菌物质在pH6.0～pH8.0的范围内稳定性高,对蛋白酶K和胰蛋白酶敏感度低。除肠道致病菌外,FJAT-10011还能显著抑制尖孢镰刀菌生长,其效果相当于1mg·ml-1的潮霉素。以发酵上清液蛋白酶活力和拮抗大肠杆菌效果为指标,通过单因素和正交试验对FJAT-10011发酵条件进行优化。确定优化培养基组成:蛋白胨12.5、可溶性淀粉12.5、NaC15、牛肉浸粉3、磷酸氢二钾0.5、硫酸镁0.5g·L-1。优化培养条件为:发酵初始pH5.5、发酵温度25℃、发酵培养基装液量30ml/250ml、种子液接种量1%、发酵时间24h。优化发酵条件下获得的蛋白酶活力为8.41U.ml-1,是初始培养条件的141倍。抑菌直径为15.71mm,比未优化时提高35.31%。单因素试验研究不同化合物对菌株FJAT-10011活菌数的影响,结果表明复合比单一化合物更能提高菌株耐热性,选择脱脂奶粉、蔗糖、甘露醇及碳酸钙四种化合物进行正交试验,确定FJAT-10011的抗热化合物配方为脱脂奶粉、蔗糖、甘露醇各5%。美丽短芽胞杆菌(B.formosus)FJAT-10011经50L发酵罐发酵后活菌数为4.47×108cfu·ml-1,喷雾干燥后样品的活菌数为6.90×108cfu·g-1,存活率约为92.62%。