【摘 要】
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目的:头颈部肿瘤患者放疗后导致唾液腺损伤,从而出现放射性口干症,口干症的发生影响患者的正常饮食、交谈,更甚者引起口腔局部感染、疼痛,这些问题阻碍了患者康复、降低患者生活质量。临床研究发现用乌梅甘草喷雾剂(主要成分:乌梅、甘草)干预可以促进唾液分泌,改善口干症;基础研究发现,乌梅甘草合剂可以降低放射性损伤细胞凋亡率。乌梅的主要成分之一是柠檬酸,而柠檬酸常常被用作酸刺激法刺激分泌唾液。本研究通过建立放
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目的:头颈部肿瘤患者放疗后导致唾液腺损伤,从而出现放射性口干症,口干症的发生影响患者的正常饮食、交谈,更甚者引起口腔局部感染、疼痛,这些问题阻碍了患者康复、降低患者生活质量。临床研究发现用乌梅甘草喷雾剂(主要成分:乌梅、甘草)干预可以促进唾液分泌,改善口干症;基础研究发现,乌梅甘草合剂可以降低放射性损伤细胞凋亡率。乌梅的主要成分之一是柠檬酸,而柠檬酸常常被用作酸刺激法刺激分泌唾液。本研究通过建立放射性损伤的原代SD大鼠颌下腺(Submandibular gland,SMG)细胞模型,对比探讨乌梅甘草合剂和柠檬酸对放射性损伤颌下腺细胞的影响,为乌梅甘草合剂的临床推广应用提供依据。方法:建立SD大鼠原代颌下腺细胞体外培养体系并观察细胞特征。采用MTT法检测不同浓度的柠檬酸对放射性损伤大鼠颌下腺细胞的增殖活性,确定柠檬酸给药浓度。利用流式细胞技术检测柠檬酸对损伤模型细胞凋亡率的影响。采用MTT法检测乌梅甘草合剂和柠檬酸对颌下腺细胞的毒性。镜下观察对比乌梅甘草合剂与柠檬酸对放射性损伤颌下腺细胞形态的影响。用Western-blot.技术检测凋亡蛋白bax、bcl-2表达水平,对比探究乌梅甘草合剂和柠檬酸对放射性损伤大鼠颌下腺细胞凋亡的影响。结果:1.相差倒置显微镜下观察到刚获取接种的颌下腺细胞在呈悬浮状态的圆球形,轮廓清晰光滑,有环形光晕,分散在培养液中,细胞接种24h后慢慢贴壁生长,而后包质展开,可见扁平多边形,细胞数量增多融合成片,成“铺路石”、“鹅软石”状。2.用4种不同浓度的柠檬酸对损伤模型细胞干预后,颌下腺细胞生存率发生变化,其中10ug/mL柠檬酸组颌下腺细胞生存率明显提高(P<0.05)。3.用10ug/mL柠檬酸干预放射性损伤的颌下腺细胞,细胞凋亡率无明显改变(P>0.05)。4.乌梅甘草组(50ug/mL,前期研究所得最佳浓度)、柠檬酸组(10ug/mL)对正常颌下腺细胞生存率无明显影响(P>0.05)。5.建模24小时后形态学观察到,正常组细胞排列紧密,呈扁平多边形,边界清晰,成“铺路石”、“鹅软石”状。模型组细胞收缩,边界不清,死亡细胞增多,细胞间距变大,密度减小。与模型组比较,乌梅甘草组和柠檬酸组细胞数量增多,细胞间距变小,密度增大。6.与正常组比较,模型组Bax/Bcl-2蛋白表达显著增多(P<0.05);与模型组比较,50ug/m乌梅甘草组的Bax/Bcl-2蛋白表达显著减少(P<0.05);与模型组比较,10ug/mL柠檬酸组的Bax/Bcl-2蛋白表达变化不明显(P>0.05)。结论:1.乌梅甘草合剂可能通过调整Bax/Bcl-2平衡,从而抑制损伤颌下腺细胞的凋亡。2.目前研究表明,10ug/mL柠檬酸,可以促进放射性损伤颌下腺细胞增殖。3.10ug/mL柠檬酸对放射性损伤细胞凋亡率无影响,对细胞凋亡率无影响可能是因为对凋亡蛋白Bax/Bcl-2比值的表达无影响。
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