如今,越来越多的致病菌产生耐药性已成为全球性的公共健康危机,而研究发现细菌的程序性死亡途径有望成为新抗生素的作用靶目标。YihE激酶作为细菌程序性死亡途径中的关键调控因子,在药物处理时能够保护细菌。同时,ROS与抗菌药物的杀菌作用密切相关,细菌胞内羟自由基的累积是药物杀菌的主要机制之一。但是,YihE对细菌的保护作用是否与ROS的产生和积累有关目前还不清楚。本论文工作中,我们对大肠杆菌YihE对细菌的保护作用与ROS的相关性进行了研究。通过检测yihE和cpx基因的突变株对抗菌药物萘啶酸的敏感性,发现YihE蛋白和Cpx双组份调控系统在萘啶酸处理时对细菌都具有保护作用,且Cpx系统主要通过YihE蛋白来实施对细菌的保护。另外,H2O2杀菌实验中发现YihE在应对H202的氧胁迫时对细菌的保护作用涉及Cpx系统,其可能主要通过YihE来应答H202压力。为进一步了解YihE的功能和ROS的关系,我们检测了在抗坏血酸和还原型谷胱甘肽存在下YihE对细菌的保护作用,结果发现抗坏血酸和谷胱甘肽均可保护大肠杆菌抵御萘啶酸的杀菌作用,进一步说明YihE对细菌的保护作用与ROS有关。此外,还发现抗坏血酸和谷胱甘肽在萘啶酸处理时对细菌的保护作用可能源于相同途径。同时还分析了与ROS相关的5个基因soxR、oxyR、ahpC、katG和yaaA在野生型和yihE突变株中的表达,发现相比野生型,yihE突变株中这5个基因的表达都升高了,说明YihE对细菌的保护作用可能涉及细菌胞内ROS的变化。经萘啶酸处理后,在野生型菌株中它们的表达也都升高了,而在yihE突变株中除katG外表达都降低了,表明在缺失了 YihE时,细胞对药物处理所产生的氧化胁迫的应激反应能力降低。通过以上工作,发现大肠杆菌YihE对细菌的保护作用与ROS相关,可能涉及到超氧自由基、过氧化氢和羟自由基的累积。本研究可帮助我们进一步了解细菌与外界环境的相互作用及其在抗菌药物存在下的生存机制,从一个全新的角度认识药物作用机理和细菌耐药性的产生,同时也为今后研发针对细菌自我保护系统的新药奠定理论基础。