论文部分内容阅读
海蜇是一种药食两用的海洋生物,是我国传统渔业生产的主要大型食用水母。研究表明,多糖是海蜇的主要活性物质之一。本课题组前期的研究发现海蜇粗多糖具有免疫调节活性,本文以此为基础,以海蜇为原材料,重点开展了海蜇多糖的提取、分离纯化、结构鉴定和免疫活性方面的研究,主要实验结果如下：(1)海蜇经水提醇沉获得总多糖,利用DEAE Cellulose DE52离子交换层析和Sephacryl S-500凝胶渗透色谱柱对总多糖进行分离纯化,获得一种均一组分海蜇多糖JSP11,相对分子质量为1.25×10-Da。(2)单糖组成分析显示,JSP11是由甘露糖、半乳糖和葡萄糖醛酸组成,其分子摩尔比为2.18：1.00：1.94。甲基化实验结果表明,JSP11包含1,3,6-Matp、 1,6-Galp和1-GlcpA三种糖苷键连接方式,各糖残基的组成摩尔比为1.98：1.00：2.03。依据JSP11的基本结构特征,并结合NMR分析的结果,对JSP11中单糖残基的C、H化学位移进行了归属,并对不同糖苷键的连接顺序进行了确证。(3)MTT实验结果说明在10～200μg/mL浓度范围内,JSP11能促进RAW264.7巨噬细胞的生长,无细胞毒性。NO和细胞因子的含量分析显示,JSP11在10-200μ/mL浓度范围内能促进RAW264.7巨噬细胞产生NO、TNF-a和IL-1β,且呈剂量依赖性,当JSP11剂量达到200μg/mL时,NO、TNF-a和IL-1β的产生量分别比对照组提高了140%、77%和53.8%,表明JSP11具有免疫调节活性。PMB屏蔽实验证明JSP11未受LPS的污染。荧光定量RT-PCR实验表明,JSP11能诱导iNOS、TNF-a和IL-1βmRNA在RAW264.7细胞中的表达,且呈量效关系。Western Blot实验结果表明,JSP11促进NF-κBp65的核移位,与对照组相比,多糖处理组p-P38、p-ERKl/2、p-JNK和p-Akt的蛋白表达量明显提高,说明JSP11能通过NF-κB、MAPKs和PI3K/Akt信号通路激活RAW264.7巨噬细胞。