【摘 要】
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本研究以东方百合作为试验材料,克隆百合花芽分化过程中的lfy基因,为全面了解百合花芽分化过程中的分子机制奠定基础。以百合花芽分化过程五个时期的百合鳞茎为研究材料,采用
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本研究以东方百合作为试验材料,克隆百合花芽分化过程中的lfy基因,为全面了解百合花芽分化过程中的分子机制奠定基础。以百合花芽分化过程五个时期的百合鳞茎为研究材料,采用双波长法分别测定百合内层鳞茎、中层鳞茎和外层鳞茎中的直链淀粉、支链淀粉和总淀粉的含量;同时对这五个时期的内层鳞茎、中层鳞茎和外层鳞茎中的淀粉粒进行扫描并研究淀粉粒的变化情况。主要研究结果如下:1获得了百合幼嫩花芽RNA的最佳提取方法。利用CTAB法、Trizol法、Trizol改良法以及RNA提取试剂盒等四种RNA的提取方法提取百合花芽的RNA,结果发现仅RNA提取试剂盒方法提取的RNA质量和完整性最好。2运用PCR技术克隆出百合的lfy基因。设计lfy基因的特异引物,提取百合幼嫩花芽的RNA,进行RT-PCR,结果在830bp左右出现了目的条带。通过切胶回收、连接转化、挑取单克隆和测序,利用NCBI和DNAMAN软件对该基因序列与已知的百合Lilfyl基因序列blast比对,结果发现,该基因与百合的Lilfyl基因的同源性高达94%。说明本研究所获得的基因即为要克隆的东方百合lfy基因。3东方百合lfy基因在花芽分化的五个时期中,在花原基分化期的表达量最高,其次在花被原基分化期有表达,而在其他三个时期中均没有表达。4测定了东方百合内层鳞片、中层鳞片和外层鳞片中的直链淀粉、支链淀粉和总淀粉的含量。发现在东方百合鳞茎中不同部位的鳞片中的三种淀粉含量随着花芽分化过程的进行逐渐降低,并且三种淀粉含量分别在不同时期、不同部位均达到了极显著水平。5不同时期中不同部位淀粉粒的变化情况相同。淀粉粒随着花芽分化过程的进行逐渐出现变化,淀粉粒的数量先增加后减少,且淀粉粒的大小是逐渐减小的,在花芽分化后期大颗粒存在很少,这与淀粉含量的变化一致。
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