研究背景随着辅助生殖技术的开展、人群中整体孕龄的增加及促排卵药物的使用,双胎妊娠率随之上升,平均可达3%。由于双胎妊娠胎儿染色体异常的发生率较单胎妊娠明显升高,因此双胎妊娠产前筛查不可忽视。双胎妊娠利用传统血清学标志物、NT、年龄筛查的准确性较单胎低,假阳性率偏高,且双胎妊娠行介入性产前的诊断的流产、早产率较单胎明显升高,故临床上需要经济、安全、检出率高、假阳性率低的方法对双胎妊娠进行产前筛查。无创产前基因检测(noninvasive prenatal testing,NIPT)可利用母体外周血中的胎儿游离DNA(cell-free fetal DNA,cffDNA)筛查胎儿染色体非整倍体,目前已在临床中得到广泛应用,但在双胎妊娠中相关研究局限,且仍然存在一定的局限性。研究目的1.了解产前筛查从业人员和孕妇对NIPT的态度、知晓率和解读情况,为NIPT相关的知识宣教及检测前咨询的规范等关键领域的改进提供依据;2.加强对国内外双胎妊娠非整倍体筛查现状的认识,明确NIPT在双胎妊娠非整倍体筛查中的应用价值和潜在风险;3.了解本中心近年来双胎NIPT的检测情况及进行胎儿游离DNA富集后的优化效果,为NIPT进一步临床推广与实施提供依据。方法1.采用问卷调研的方式,按相关技术标准设计问卷,对广东省内的多家不同等级医疗单位、产前筛查和诊断中心的相关从业人员进行问卷调查;2.通过对2020年3月之前国内外公开发表的利用孕妇血浆中胎儿游离DNA筛查双胎妊娠非整倍体的临床研究,进行检索、筛选、评价,并最终纳入17篇高质量研究进行meta分析;3.回顾分析广东省妇幼保健院医学遗传中心2015年至2019年间利用半导体测序平台对双胎妊娠孕妇外周血样本进行无创产前筛查的检测情况,并进行效果评价。结果1.共回收615份问卷,有效问卷572份,回收有效率为93.01%,其中213份为医务人员填写,359份为孕妇填写。93.62%的调查对象认为应该为双胎妊娠孕妇提供NIPT且绝大多数调查对象认为为双胎妊娠提供NIPT的风险大。产前筛查从业人员对双胎妊娠NIPT相关知识了解不够,产前诊断医师和实验室人员对NIPT相关知识的知晓率高于产科医师(P=0.000);仅有6.50%的临床医师认为个人为双胎孕妇提供的遗传咨询全面详细。孕妇对于NIPT的相关知识欠缺,主要依赖于医师的咨询和讲解,和单胎妊娠孕妇相比,双胎妊娠孕妇对NIPT的接受意愿更强烈,且可能拒绝产前诊断的比例更高。2.本meta分析共涉及9754例双胎孕妇,其中21三体占1.27%,18三体占0.5%,13三体占0.22%。检测到107例21三体,漏检2例,假阳性7例;检测到18三体33例,漏检4例,假阳性2例,检测到13三体阳性9例,漏检1例,假阳性8例。109例为21三体,37例为18三体,10例为13三体,结果显示NIPT筛查双胎妊娠21-三体、18-三体和13-三体的灵敏度分别为98%、89%和99%,特异性为100%。本研究显示,NIPT检测双胎妊娠T21具有很高的表现敏感性和特异性,NIPT对单胎妊娠的检测准确率相似,特异性比敏感性稍高,T21的检测效能要比T18和T13更好。3.利用半导体测序平台对孕11~30周双胎孕妇母体外周血的胎儿游离DNA进行大规模平行测序筛查胎儿染色体非整倍体的检出率为100%,灵敏度为100%,特异度为99.73%,阳性预测值为91.67%,假阳性率为0.27%。NIPT检测双胎妊娠21、18、13三体的灵敏度均为100%,特异度分别为99.92%、100%和100%,假阳性率分别为0.08%、0%和0%,阳性预测值分别为87.50%、100%和100%。本实验室检测过程中利用胎儿游离DNA片段大小的特点对其进行富集,平均胎儿游离DNA浓度由13.39%提升至18.24%的同时检测失败率明显降低(P<0.05)),大部分孕妇(97.34%)可在首次抽血后获得NIPT检测结果,即使是首次检测失败的病例,仍可以通过重复采血得到的检测结果。结论1.合理及正确应用NIPT的关键在于临床医生如何解释和孕妇如何理解NIPT,当前临床医生和双胎孕妇对NIPT却了解较少或不够深入,应该加强规范化管理、人员培训、宣教、随访,从而帮助孕妇更大程度上知情选择。2.在双胎妊娠中,NIPT筛查双胎妊娠21-三体的效能与已报道的单胎孕妇结果相似,优于早孕期联合筛查与中孕期联合筛查,准确性接近金标准。由于13-三体病例数较少,尚不能给出精确评估结果。3.双胎NIPT检测染色体非整倍体的准确性高,但无法判断异常胎儿的个数和位置,必须通过产前诊断确诊,通过FF的富集可以进一步优化双胎NIPT的临床应用。