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目的 1.改进大鼠HSC的分离方法。 2.探讨姜黄素对HSC增殖与凋亡的影响。 方法 二氯亚甲基二磷酸盐处理SD大鼠后,原位胶原酶灌注结合密度梯度离心法分离大鼠HSC,计算细胞得率和细胞活力,采用荧光显微镜观察HSC自发荧光、Desmin免疫组化染色进行HSC的鉴定,内源性过氧化物酶染色检测枯否细胞。 肝星状细胞株HSC-T6与姜黄素孵育后,MTT比色法检测姜黄素对HSC增殖的影响,流式细胞术分析姜黄素对HSC细胞周期的影响,流式细胞术、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。 结果 HSC的得率为2×107~3×107细胞/大鼠,活率在95%以上,在328nm激发光下自发蓝绿色荧光,Desmin阳性细胞在90%以上,未检测到内源性过氧化物酶阳性细胞。 20~100μmol/L姜黄素可以抑制HSC增殖(p<0.05),半数致死量为89μmol/L。以20、40、60μmol/L姜黄素作用24h后,细胞周期分析发现S期细胞减少,G2/M期细胞显著增加(P<0.05);流式细胞术检测到明显的亚G1峰,各组的凋亡指数(%)分别是15.3±1.88,26.7±2.79,37.6±4.38,与对照组(1.9±0.64)相比,差异有显著性(P<0.01);透射电镜观察到细胞皱缩、核染色质浓缩沿核膜排列和凋亡小体形成等细胞凋亡特征性的改变;琼脂糖凝胶电泳可以见到明显的DNA梯状带形成。以40 μmol/L姜黄素作用12、24、36、48h,各组的凋亡指数(%)分别是12.0±2.35,26.7±3.47,33.8±1.78和49.3±1.56,与对照组相比,差异具有显著性(P<0.01)。姜黄素对肝星状细胞增殖与凋亡的影响的初步研究中文摘要结论 1.建立了一种改进的不含枯否细胞的HSC分离方法。 2.姜黄素可以使HSC细胞周期停滞于GZ/M期。 3.姜黄素可以抑制HSC增殖,诱导其发生凋亡,具有剂量和时间依赖性。