本文使用两种不同的方法对实验室自制的Candiad sp.99-125脂肪酶进行了固定化研究,优化了固定化条件,并考察了不同方法固定化酶的催化性能,并对其微观结构进行了表征。以化学改性后的壳聚糖为载体固定化脂肪酶,研究了不同的活化剂对壳聚糖表面羟基基团的活化程度,及以活化后壳聚糖为载体采用不同固定化方法对假丝酵母脂肪酶固定效果的影响。结果表明1-乙基-3-(3-甲基氨基)丙基碳二亚胺可有效的活化壳聚糖表面羟基,活化后的壳聚糖表面氨基与戊二醛偶联后形成的壳聚糖为良好的脂肪酶固定化载体,其固定脂肪酶的水解活力可高达86.8U/g。此外,还对影响固定化进程中的各种因素进行了研究,确定最优条件,比较了固定化前后酶的热稳定性、有机溶剂稳定性及最适反应温度。并考察了使用该方法固定化脂肪酶催化棕榈酸和十六醇合成棕榈酸十六酯的操作稳定性,结果表明,连续反应16批之后棕榈酸十六酯的转化率仍能达到85%以上。以海藻酸钠为载体,包埋法固定化脂肪酶,分别对粗酶粉和发酵液进行了固定化,并确立了最优的固定化条件,结果表明,海藻酸钠直接包埋假丝酵母发酵液制备的固定化脂肪酶能有效的催化合成生物柴油,在海藻酸钠浓度为1%、CaCl2浓度为1%、pH值为7.4、固定化1h后制备的固定化酶具有最佳的催化能力,采用四次流加甲醇的方式,在体系水含量为10%(水与油的质量比),反应温度为40℃条件下,单批转化率最高达到97.3%,使用D-海藻糖包复后,连续反应6批后转化率降为原来的50%,；海藻酸钠包埋粗酶粉制备的固定化脂肪酶,海藻酸钠的浓度为2%,酶浓度为0.5%,将二者的混合液滴入到1%的CaCl2溶液中,固定化1h,得到的固定化酶的活力最高。酶学性质研究表明,此方法固定化脂肪酶与游离酶相比热稳定性好,在70℃下仍能保持原来活力的54.7%,并在无溶剂体系中讨论了该固定化酶催化大豆油生产生物柴油,确定了适宜的醇/油摩尔比、酶用量、反应温度和水含量分别为1：1,10%,40℃和15%,采用分步加入甲醇的方式可减轻甲醇对酶的毒害作用,为了防止脂肪酶的流失,采用D-海藻糖和正硅酸甲酯包衣固定化酶,并比较了其三种不同固定化酶的催化合成生物柴油的操作稳定性,其中D-海藻糖包衣的固定化酶应用在无溶剂体系中的半衰期达108小时,对于生物柴油的生物合成具有很大的应用潜力。