基于大豆过氧化物酶标记免疫蛋白芯片研制

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蛋白芯片是将不同种类的蛋白质分子固定在固相芯片表面,由于每一种蛋白分子都排列成有序的点阵,在不同的位置上固定相应的蛋白,根据确定的蛋白位点与待检测的分子的对应关系,可以在一次检测反应中实现多种分子的同时检测,具有一次性检测样品大,样品消耗低,检测成本低,检测结果准等优点,对于多种生物标志物的联合筛查具有重要的意义。  本文以硝酸纤维素膜(NC膜)为固相载体,同时将两种或多种抗体固定在NC膜表面,制备了血清学标志物多组分组合芯片,使用大豆过氧化氢酶(SBP)代替常规的辣根过氧化氢酶(HRP)作为标记酶制备生物探针,通过夹心免疫方法将待测目标物和上述生物探针捕获到NC膜表面,利用化学发光法检测目标物的浓度,建立基于大豆过氧物酶标记探针的目标分析物的化学发光分析方法。具体研究工作如下:  (1)构建唐氏综合征产前筛查血清学组合芯片,实现对游离雌三醇(uE3)、抑制素A(Inhibin-A)、甲胎蛋白(AFP)、人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-HCG)四项血清学标志物的同时检测。在NC膜表面的不同位置同时固定四种捕获抗体,构建出四种抗体的组合芯片;通过夹心免疫反应将四种待测抗原,生物素标记的对应检测抗体,SBP标记的链酶亲和素(SA)依次结合到芯片表面,利用大豆过氧化物酶催化化学发光反应,使用化学发光免疫成像的方法实现对四种抗原的同时检测。  (2)在上述多组分检测芯片的基础上,将总前列腺特异抗原(t-PSA)和游离前列腺特异抗原(f-PSA)有序的固定在NC膜上,制备了基于SBP标记抗体的PSA免疫检测试剂盒,在单孔内可同时检测两种抗原并平行测定3次。
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