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激素依赖型哮喘(steroid-dependent asthma,SDA)属于难治性哮喘范畴,是临床医师面临的难题之一。随着对哮喘气道炎症本质的认识,吸入型糖皮质激素(GC)已成为哮喘治疗的首选药物。尽管如此,临床上仍有许多患者需长期静脉或口服激素治疗,而 GC 的大量使用不仅带来各种毒副反应,更使机体免疫力下降,HPA 轴功能严重抑制,同时引起糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor, GCR)水平或亲和力下降,最终导致部分患者对 GC 的依赖,激素一旦减量或停用,即引起哮喘复发或加重,形成 SDA。 SDA 在撤药期间表现为气道炎症持续存在和 HPA 轴的严重受损,炎症的存在主要由于 T 淋巴细胞亚群 Th1/Th2 比例失衡,即 Th1 型细胞功能被抑制,Th2型细胞处于激活状态,后者通过分泌白介素 4(IL-4)、白介素 5(IL-5)等细胞因子促使嗜酸性粒细胞(EOS)、肥大细胞等炎症细胞不断分化、聚集和激活以及 IgE 的合成,从而使气道反应性持续增高,同时大量外源性激素反向调节GCRmRNA 的转录水平,使其数量减少或活性降低,导致患者对激素的依赖。激素一旦减量或停用即可引起哮喘复发,严重甚至导致死亡。因而,对激素依赖型哮喘治疗是当今研究的热点,寻求既要能恢复因激素大量长期应用而被抑制的 HPA 轴功能,又能够调节 Th1/Th2 比值,从而降低气道高反应性,减少激素治疗用量,减轻全身性不良反应的有效方案,实现对患者生活质量的全面提高。 导师武维屏教授经多年临床探索和实验研究认为:阴阳两虚,虚风内动,痰瘀互阻,寒热错杂是激素依赖型哮喘的基本病机特点。在激素撤减过程中,SDA 患者病机以痰瘀互阻为基础,相继表现为阴虚火旺(撤前),阴阳两虚(撤中),肾阳亏虚(撤后)的病机演变规律,并据此理论提出了以知柏地黄丸合金水六君煎,乌梅丸,金匮肾气丸合当归芍药散构成的三步序贯法,即撤前滋阴降火,兼化痰瘀;撤中寒热并用,气血双调,标本兼顾;撤后温阳补肾,化痰活血。从而使机体神经—内分泌—免疫网络系统重获稳态,而激素得以撤除,哮喘得以控制。 1. 目的 本实验即以上述理论为基础,通过对哮喘模型腹腔注射地塞米松,制备经过激素干预后的哮喘大鼠模型,旨在模拟临床激素依赖型哮喘患者证候学变化。通过研究激素干预后哮喘模型大鼠在撤药过程中及应用中西药治疗后气道炎症和 HPA 轴相应指标的变化情况,揭示激素依赖型哮喘撤减激素过程中的病机演2 三步序贯法对激素干预哮喘大鼠气道炎症和 HPA 轴影响的实验研究变规律及其内在物质基础,探讨三步序贯法中药复方治疗 SDA 的疗效机制及作用环节。2.方法2.1 测定肺功能:用小型动物肺功能仪测定。2.2 ELISA 法测定血浆 IFN-γ和 IL-4,CRH,垂体 ACTH,血浆皮质酮含量。2.3 原位杂交方法测定肺组织 IFN-γ和 IL-4 mRNA 表达。2.4 RT-PCR 方法半定量分析肺组织内 GCRmRNA 的表达。2.5 统计方法:所有数据以 表示,组间差异利用 SPSS11.0 统计软件包进行 ANOVA 检验,以 P<0.05 差异有显著性。x ±s3. 内容3.1 三步序贯法对激素干预后哮喘模型大鼠肺功能和肺组织形态学的影响研究3.2 三步序贯法对激素干预后哮喘模型大鼠 IFN-γ和 IL-4 含量及其 mRNA 表达的影响研究3.3 三步序贯法对激素干预后哮喘模型大鼠 IL-5 mRNA 表达的影响研究3.4 三步序贯法对激素干预后哮喘模型大鼠 HPA 轴功能及 GCRmRNA 的影响研究4. 结果与结论4.1 一般生活状态变化:与正常对照组比较,哮喘模型组激发后表现为:呼吸急促,严重者呼吸减慢,节律不齐,时快时慢,喷嚏或咳嗽,口鼻、四肢和尾尖轻度紫绀,活动明显减少或俯卧不动。随着激发次数的增多,上述症状逐渐加重,经连续激发后体重减轻,毛发无光泽,反应迟钝,呼吸及幅度紊乱。与哮喘模型组比较,激素干预后模型组在撤前(第 1～2 周),上述呼吸道症状有所好转,但出现饮水增多,易激惹等阴虚阳亢表现;在撤中(第 3～7周),随着激素的减量,呼吸道症状又逐渐出现,表现为时有呼吸急促,喷嚏或咳嗽,同时伴有口鼻、四肢和尾尖不同程度紫绀,肢端及尾部肤冷,喜蜷卧或群卧于动物箱角落,活动明显减少,饮食减少,毛发少泽;在撤后(第 8～9周),大鼠除上述症状外,紫绀肢冷更甚,小便量多且时有稀便,行动呆钝。与激素干预组比较,在撤前,三步序贯组的呼吸急促,节律不齐和幅度不规整等症状明显减轻,类似于普米克组;在撤中和撤后,三步序贯组呼吸道症状基本控制,而普米克组呼吸道症状虽被控制,却有不同程度的四肢发凉,口鼻、眼眶、尾尖紫绀明显,毛发粗糙少泽,喜群卧不喜动等症。此类症状在三步序贯组明显改善。中文摘要 34.2 肺功能和病理学改变:与正常对照组比较,哮喘模型组大鼠激发后,肺通气功能降低,表现为吸气阻力(Ri)和呼气阻力(Re)显著增大,气道的顺应性(cl)明显降低,最大通气量(MVV)显著减少,0.3 秒率(EFV0.3%)、0.3%呼出容积占用力肺活量百分比(EFV0.3%/FVC)、用力呼气峰流量(PEF)、用力呼气中期流量(FEF25-75%)明显降低。病理形态学改变为支气管粘膜上皮部分排列紊乱,部分粘膜上皮脱落、中断,管壁及周围大量嗜酸性粒细胞、淋巴细胞聚集,支气管粘膜轻度水肿,腔内可见少许炎症细胞,部分肺泡可见轻度萎陷及扩张,肺泡隔内?