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杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)系杜仲科Eucommiaceae杜仲属Eucommia植物,是我国特有的珍稀保护树种,既是传统名贵中药材之一,也是温带最具开发前景的胶源植物。为了通过转基因技术进一步发掘杜仲胶用及药用价值,探索基因构建Hsp18.2:flp-35S:ipt在遗传转化困难植物转基因及快速繁殖中的运用,本研究完善了杜仲再生体系,建立了农杆菌介导的杜仲遗传转化体系,通过农杆菌介导法将该基因构建转化矮牵牛、烟草和杜仲,研究了ipt基因对植株转化及生长发育的影响,探索了热激启动子Hsp18.2驱动的基因删除系统在烟草、矮牵牛中的删除条件及效率,取得如下主要结果: 1、农杆菌介导含基因删除系统表达载体对矮牵牛、烟草的遗传转化及基因热激删除的研究 利用农杆菌介导法将Hsp18.2:flp及Hsp18.2:flp-35S:ipt分别转化矮牵牛(Petunia axilaris)及烟草(Nicotiana tabacum cv.Xanthin),在100mg/L kan的筛选压下进行筛选获得转基因植株。 ipt基因表达有效促进了进烟草、矮牵牛遗传转化过程中不定芽的诱导,转ipt基因矮牵牛能够产生大量分枝,易于增殖培养。但转ipt基因的植株生根受到明显抑制。 由于表达载体含有基因删除系统,采用44℃、6 h热激6次,先后对309株转基因矮牵牛及191株转基因烟草进行热激,通过GUS检测。有61株矮牵牛,42株烟草没有检测到GUS活性。其中有2株转基因矮牵牛ipt06-01及ipt11-03在热激后表型发生明显变化,其新生叶片叶柄变长,叶型恢复,同时根部开始发育,植株恢复顶端优势并开始长高,形态学特征逐步呈现出野生型特征。通过PCR及RT-PCR检测,结果表明外源基因己被删除。