壳聚糖基纤维对肝组织创面止血作用的研究

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目的:肝脏至少承担着5000种以上的生理功能,是人体最重要的器官之一。由于肝脏是多血管的实质性脏器,外伤时常伴有大量的出血,常用的经典止血方法有直接压迫、结扎和电灼止血等,但死亡率仍达2%-8%,其中出血为最常见的原因。目前临床肝脏外科手术常用的止血材料包括可吸收明胶海绵、氧化纤维素、胶原蛋白海绵和纤维蛋白胶,但由于有些产品或与创面粘附性差,或其准备耗时,在肝脏外伤手术中使用受限。壳聚糖(Chitosan)是甲壳素脱乙酰基的产物,天然无毒、无抗原性、生物相容性好、可生物降解且具有一定的生物活性,壳聚糖经衍生化后具有良好水溶性、成膜性,抗炎、螯合重金属等作用,在医用材料领域应用前景广阔。本实验研究旨在讨论壳聚糖基纤维的止血和促进创面愈合的效果,并对其作用机理进行初步探讨,为其作为创伤止血愈创材料提供一定的理论依据。方法:1、实验所用壳聚糖基纤维性质评价,运用物理化学方法对纤维的理化性质进行评价,通过溶血实验、全身急性毒性实验、皮内刺激实验和细胞毒性实验评价了纤维的生物相容性;2、以新西兰白兔为实验动物,切除兔肝脏左叶部分组织,形成肝脏敞开型创面出血模型。设立实验组、对照组和空白组,实验组使用壳聚糖基纤维敷于创面处,空白组使用普通纱布,对照组使用速即纱。通过测定每组的止血成功率和出血量,评价纤维的止血效果;通过血液凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(FIB)的测定、血液流变学、红细胞聚集和血小板粘附等实验研究了纤维对血液不同组分的作用,初步探讨了纤维的止血机理;3、以大白鼠为实验动物,在鼠肝脏左叶上制造5mm×3mm×2mm的创面,实验组将壳聚糖基纤维敷于创面上,对照组敷以速即纱,定期进行肉眼观察和行组织学检查,评价创面的粘连、炎症浸润和组织增生情况,以此反映纤维促进创面愈合的作用。以体外培养大鼠肝实质细胞BRL为研究对象,对纤维促肝细胞生长的作用进行评价。结果:1、实验所用壳聚糖基纤维符合医用材料要求,无菌无热原;溶血实验表明壳聚糖基纤维无溶血作用,相容性实验表明纤维无急性毒性和皮内刺激性,细胞毒性实验结果表明壳聚糖基纤维对L929成纤维细胞没有毒性作用,并且对L929细胞增殖有一定的促进作用,其中以100μg/mL浓度时对L929细胞的促增殖作用最为显著;2、以新西兰白兔肝脏左叶部分切除为出血模型的实验中,结果表明实验组的止血成功率为100%,出血量为0.443±0.030g,在止血率和出血量指标上均优于对照组和空白组(P<0.05);PT、FIB、APTT和TT的测定结果表明不同浓度的壳聚糖基纤维溶液对PT和APTT没有明显的作用,能使FIB浓度明显升高,且随着溶液浓度的增加FIB浓度逐渐增加,TT随溶液浓度的增加而缩短;血液流变学测定结果显示壳聚糖基纤维溶液在高、中、低切变率下均能使全血粘度升高;壳聚糖基纤维能显著促进红细胞的沉降,且随着溶液浓度的增加沉降量增加,同时能促进红细胞发生叠连;壳聚糖基纤维能够吸附血小板,促进血小板的聚集;3、在促进创面愈合的动物活体实验中,组织学切片观察结果表明实验组材料体内降解时间短、炎症细胞浸润少,创面愈合效果明显优于对照组;壳聚糖基纤维能促进肝细胞的的生长,在100μg/mL浓度时促进作用最为显著。结论:本研究中的壳聚糖基纤维符合生物医用材料的要求,具有良好的生物相容性和生物可降解性,在体内和体外止血作用显著,效果明显优于速即纱,粘附创面的能力强,用于肝创面止血后,局部刺激反应少,降解吸收快,能诱导肝细胞的再生,因而是一种良好、安全的止血和促进创面愈合的材料。
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