吻素(Kisspeptin,Kp)是由KISS1基因编码的神经肽,在哺乳动物生殖器官发育、初情期启动、季节性发情、精子发生、卵泡成熟与排卵等生殖内分泌调控过程中发挥着极其重要的作用。Kisspeptin在动物繁殖中具有潜在的应用价值,而现在商品化的Kisspeptin药品却十分昂贵。本研究旨在用毕赤酵母表达绵羊吻素Kp53,并对其生物活性进行测定,为其在动物繁殖中的应用奠定基础。根据毕赤酵母的偏好密码子对绵羊Kp53的编码序列进行优化,将其克隆到p PICZαA质粒构建成重组表达载体p PICZαA-Kp53。将鉴定正确的重组质粒与空质粒经Sac I线性化后电转入毕赤酵母GS115。甲醇诱导阳性转化子表达,用BCA法检测发酵上清液总蛋白浓度,并以Tricine-SDS-PAGE和Western Blot对表达产物进行鉴定。为了提高表达量,实验对诱导时间、诱导温度及甲醇浓度等条件进行了优化。用Ni亲和层析柱法纯化目的产物。最后,向昆明小鼠腹腔注射纯化产物,通过其对生殖激素LH和FSH水平的影响评估表达产物的生物活性。研究构建的重组表达载体p PICZαA-Kp53能够在毕赤酵母基因工程菌中表达绵羊吻素Kp53,目的产物大小约9k Da,与理论分子量大小相符。摇瓶发酵的较好诱导条件为诱导时间72h、温度26°C、甲醇浓度1%。优化诱导条件前,72h时发酵上清中目的产物表达量为0.59g/L,优化诱导条件后表达量达到0.72g/L,纯化获得了质量较高的目的表达产物。与生理盐水对照组相比,腹腔注射纯化产物后1个小时能够极显著提高小鼠血清LH的浓度,而FSH的浓度无显著差异。在毕赤酵母GS115中能够表达具有生物活性的绵羊吻素Kp53,为其在动物繁殖中的应用奠定了基础。