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脂联素作为一种主要由脂肪组织合成的具有多种生物学功能的特殊蛋白,在增强脂肪酸氧化、抗炎症反应、抗糖尿病等方面起重要作用。脂联素通过其受体(AdipoR1和AdipoR2)介导的AMPK、PPAR、p38MAPK等信号通路发挥生物学作用。近年来,越来越多的研究发现脂联素可能是参与营养调控生殖的关键信号因子。然而,脂联素及其受体在绵羊机体组织中的表达以及脂联素参与羔羊营养调控生殖的研究还未见报道。本研究以2月龄雌性羔羊为对象,首先应用qRT-PCR分析AdipoR1/2在雌性羔羊机体组织中的表达,应用IHC对羔羊卵巢和子宫组织中AdipoR1蛋白进行定位,然后应用ELISA分析限饲对绵羊血清脂联素以及相关生殖激素水平的影响,应用qRT-PCR分析限饲对绵羊下丘脑-垂体-卵巢轴上AdipoR1/2基因及相关基因表达的影响。通过以上研究探讨脂联素参与绵羊机体营养调控生殖的可能机制。1.AdipoR1/2基因在雌性羔羊机体组织中的表达及AdipoR1蛋白在卵巢和子宫中的定位研究为了研究AdipoR1/2基因在雌性羔羊机体组织中的表达及定位,选择6只2月龄雌性杜湖杂交F1代绵羊,放血屠宰后,采集下丘脑、垂体、一侧卵巢和子宫、松果体、视网膜、大脑、小脑、脑桥、嗅脑、乳腺、心脏、肝脏、脾脏、肾脏和骨骼肌共16种组织液氮冻存,另一侧卵巢和子宫样品置于多聚甲醛固定。应用qRT-PCR检测AdipoR1/2基因的表达,结果发现,AdipoR1基因在骨骼肌中表达量最高,在大脑、小脑、视网膜、心脏中表达量其次,在其余11种组织中表达量较低;AdipoR2基因在肝脏中表达量最高,在心脏、大脑、小脑、视网膜、卵巢中表达量其次,在其余10种组织中表达量较低。应用IHC研究AdipoR1蛋白在羔羊卵巢和子宫上的定位,结果发现,AdipoR1蛋白特异性表达于各级卵泡的卵母细胞以及子宫内膜的腔上皮和腺上皮细胞中。这些结果为研究脂联素系统在生殖中的作用提供试验依据。2.限饲对雌性羔羊下丘脑-垂体-卵巢轴脂联素系统及相关基因表达的影响为了研究限饲对绵羊脂联素系统及相关基因表达的影响,将18只2月龄雌性杜湖杂交F1代绵羊分为3组:对照组(C:自由采食)、低限饲组(LR:70%自由采食)和高限饲组(HR:50%自由采食)进行饲喂。2个月后屠宰,收集血清和下丘脑-垂体-卵巢组织。ELISA结果表明:限饲提高了雌性羔羊血清脂联素水平,降低了 LH、FSH、E2、P4激素水平。qRT-PCR结果表明,限饲提高了HPO轴上AdipoR1/2基因表达水平,降低了下丘脑KISS-1、GPR-54、GnRH基因、垂体FSHHβ、基因和卵巢StAR基因表达水平。这些结果表明脂联素系统可能参与绵羊机体能量平衡调控生殖功能的过程。