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目的观察小鼠死后不同时间下的小脑组织形态学变化,探讨小鼠小脑组织3种circRNA在两种温度下的降解规律,及其用于死亡时间推断的适用性。方法将50只昆明小鼠随机分为两个大组,用断颈法处死,分别置于4℃恒温箱和20℃恒温箱,每个大组按照死亡时间分为5个小组(死后0 h,24 h,48 h,96h,168 h),每小组5只小鼠,其中0 h组为对照组。取小鼠小脑组织,一部分保存于3%多聚甲醛溶液,做HE(伊红-苏木素)染色形态学观察;另一部分脑组织用于分子学实验,提取总RNA,利用实时荧光定量PCR技术对β-actin,Cdr1as circRNA,Rims2 circRNA及Dym circRNA的表达水平进行检测,使用SPSS19.0软件进行数据分析。结果1.对小鼠小脑组织做HE染色可见,随着时间延长小脑组织变化愈加明显,同一死亡时间(PMI,post mortem interval)下的20℃组相比4℃组变化更加明显。对照组小鼠小脑组织能够清晰观察到小脑皮质明显分为三层:分子层、浦肯野细胞层和颗粒层,无异常改变。4℃组的小脑组织可在镜下观察到死亡48h后可见细胞自溶、形态不规则等变化;96 h后细胞排列紊乱,细胞核固缩、溶解、碎裂,细胞空泡化;到死后168 h时,分子层与浦肯野细胞层不能明显辨别,细胞核少见,颗粒层尚可见。20℃组小脑组织镜下可观察到24 h时已出现细胞肿胀;48 h细胞排列结构紊乱;96 h细胞核数量明显减少(P<0.05),皮质分层模糊;168 h细胞大部分溶解,分层不明显,只有少量细胞核存在。2.Cdr1as circRNA适合作为本实验中的内参基因;Rims2 circRNA与Dym circRNA的表达量随着死亡时间增加而呈现递减趋势;4℃组Rims2 circRNA与Dym circRNA在做三次回归模型时,受PMI的影响非常大(回归方程分别为?=1.392+2.691x-0.678x~2+0.059x~3,r~2=0.752,P<0.05;?=3.767+4.034x-1.385x~2+0.151x~3,r~2=0.834,P<0.05);20℃组Rims2 circRNA与Dym circRNA在做三次回归模型时,受PMI影响较大(回归方程分别为?=3.532+0.170x+0.060x~2-0.008x~3,r~2=0.544,P<0.05;?=5.814-2.172x+0.970x~2-0.106x~3,r~2=0.512,P<0.05)。结论1.Rims2 circRNA及Dym circRNA的相对表达量受PMI影响较大(P<0.05),且随着PMI增长circRNA表达量呈下降趋势(P<0.05)。2.Rims2circRNA与Dym circRNA的三次回归模型受PMI影响更大(P<0.05),更适合作为本实验的回归模型。3.本实验中对circRNA作定量分析时,CDR1as circRNA适合作为本实验的内参基因。4.在相同死亡时间下,尸体放置于20℃时的形态学变化比4℃时变化更加明显。