论文部分内容阅读
位于母胎界面的蜕膜被认为是一个免疫豁免组织,妊娠早期大量白细胞在此选择性聚集,其中最主要的是蜕膜NK细胞、树突状细胞(dendritic cells,DCs)、单核-巨噬细胞和T细胞。这些免疫活性细胞在局部组织微环境的调控下能够获得特异性的表型和功能,从而决定局部免疫反应的取向--免疫应答或免疫耐受形成。抗原递呈细胞(antigen-presenting cells,APC)参与免疫应答的调节。树突状细胞(DCs)和单核-巨噬细胞都是重要的抗原递呈细胞(APC)。单核细胞又是DCs的重要前体细胞之一。在整个妊娠的过程中,巨噬细胞在胎盘组织都持续存在,数量充足,并且大量浸润于胚胎种植区域,提示可能与妊娠相关。利用CD14+免疫磁珠获得较高纯度的胎盘单核-巨噬细胞。其中DCs是功能最强大的专职性APC。研究证实,在蜕膜存在着DCs,并且可能参与了正常妊娠时对胎儿抗原的免疫耐受以及分娩的发动,但是其确切的机制目前仍不明了。因此,研究胎盘单核-巨噬细胞及由其分化形成的DCs的免疫学特性,对我们认识妊娠耐受和分娩发动相关的免疫学机制具有重要意义。我们利用CD14免疫磁珠获得较高纯度的胎盘单核-巨噬细胞,首先观察了不同妊娠阶段胎盘源性单核-巨噬细胞生物学特性的差异;接着利用内皮穿越模型,模拟体内单核-巨噬细胞在血管-淋巴管内外移行的过程中分化发育为树突状细胞的过程,将妊娠不同时期胎盘组织局部的的单核巨噬细胞体外诱导形成DCs,并观察不同妊娠阶段胎盘单核-巨噬细胞来源的DCs的生物学特性的差异。继而综合分析单核-巨噬细胞本身及分化形成的DCs在妊娠过程中可能发挥的作用,以帮助于理解母胎免疫耐受调节机制。第一部分结果表明,足月胎盘来源的单核-巨噬细胞低表达与细胞免疫激活有关的细胞表面标志物CD86、HLA-DR,几乎不表达CD80、CD83;表达M2型巨噬细胞标志CD206;其细胞培养上清中含有低水平的IL-10,TGF-β;具有较弱的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,与同种异体淋巴细胞混合培养上清中具有低水平的IL-10,高水平的TGF-β。相比之下,中期妊娠胎盘单核-巨噬细胞CD80、CD86及HLA-DR的表达水平较高(均P < 0.05);M2型巨噬细胞标志CD206的表达更高(P < 0.05);其细胞培养上清中IL-10、TGF-β水平显著较高(均P < 0.05);其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力也很弱,混合培养上清中同样具有高水平的TGF-β,但IL-10水平显著更高(P < 0.05)。这些结果显示,妊娠中期和晚期胎盘组织局部的单核巨噬细胞都不具有免疫激活特性,激活同种异体T细胞增殖的能力很弱;两者间最显著的区别在于中期妊娠胎盘的单核-巨噬细胞表达更高水平的CD206,分泌更高水平的IL-10和TGF-β,因此推出两者具有不同的免疫状态。中期妊娠胎盘来源的单核巨噬细胞可能具有更显著的免疫抑制调节功能,并可能主要通过诱导IL-10发挥免疫抑制功能。第二部分结果表明,足月妊娠发动时,晚期胎盘来源的单核-巨噬细胞经过内皮单层诱导培养48h后,在内皮上方再现的细胞与其前体细胞相比,具有了明显的树突状形态,高表达CD83、CD80、CD86和HLA-DR;分泌较低水平的TGF-β、不分泌IL-10,并具有很强的刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力,可以诱导与之相作用的T淋巴细胞更多的表达Th1型细胞因子IFN-γ。相比较而言,中期妊娠胎盘来源的单核-巨噬细胞经过内皮单层诱导培养48h后,在内皮上方再现的细胞表达的CD83、CD80、CD86和HLA-DR水平并未见显著增高,尤其低表达共刺激分子CD80,分泌高水平的IL-10、TGF-β,刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力也未较其前体细胞有所增强,对与之相互作用的同种异体T淋巴细胞诱导形成较多的IL-10分泌细胞。这些结果提示,妊娠不同时期胎盘源性的单核-巨噬细胞在内皮(逆)穿越模型中分化为功能不同的树突状细胞,可能参与了妊娠中期对胎儿抗原的免疫耐受及分娩发动后对胎儿抗原的免疫激活。