胸腺免疫耐受后T淋巴细胞与BV-2小胶质细胞共培养的实验研究

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目的:活化后的小胶质细胞与淋巴细胞之间的相互作用可以产生大量的促炎细胞因子。我们以前的实验研究证明,胸腺免疫耐受可以减轻炎性反应。本研究旨在探讨小鼠胸腺内注射髓鞘碱性蛋白(Myelin Basic Protein,MBP)后能否抑制共培养的T淋巴细胞和小胶质细胞之间的炎症反应。方法:72只C57BL/6雄性小鼠被随机分为3组,每组24只。A组:胸腺内注射100μl MBP(1mg/ml);B组:胸腺内注射100μl PBS缓冲液;C组:假手术组。术后第3,7,14天各组分别随机取8只小鼠,处死小鼠后无菌取出脾脏。从脾脏中分离纯化T淋巴细胞,后将T淋巴细胞与BV-2小胶质细胞按照1:2的比例共培养于加有MBP的培养基内共培养3天。通过标记CD3抗体来确定T淋巴细胞后,利用流式细胞分析技术分别检测T淋巴细胞表面CD4、CD8、CD152、CD154分子和BV-2小胶质细胞表面CD45、CD54分子的表达量;通过RT-PCR(real-time polymerase chain reaction)技术检测BV-2小胶质细胞促炎性因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、α-肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因的表达情况。利用单因素方差分析和最小显著性差异检验来分析实验数据。结果:1、与B、C两组相比较,A组CD4+/CD8+T在第3天至第7天时表现为逐渐下降趋势、术后7天时降至最低、在第7天至第14天表现为逐渐上升趋势;第7天时,A组与B、C两组差异有统计学意义(P<0.05)。2、A组CD152表达水平从第3天至第7天表现出上升趋势、第7天升至最高、从第7天至第14天表现出下降趋势(术后3、7、14天时表达水平分别为20.12±0.71%,30.71±1.14%,13.50±0.71%);与此同时,A组CD154表达水平表现为先下降后上升趋势(术后3、7、14天时表达水平分别为10.00±0.23%,5.28±0.69%,14.67±2.71%。第7天时差异有统计学意义、P<0.05)。3、对于BV-2小胶质细胞,CD45、CD54分子表达水平展现出和CD4+/CD8+T相同的变化趋势(CD45:83.39±2.56%,82.74±2.09%,87.56±2.11%;CD54:3.80±0.24%,0.94±0.40%,3.41±0.33%。第7天时差异有统计学意义、P<0.05)。4、在基因表达水平上,A组的TNF-α、IL-1β、iNOS基因表达水平显著低于B、C两组,术后第7天时的表达水平最低(P<0.05)。B、C两组差异无统计学意义。结论:胸腺内注射MBP能够抑制炎症反应;可能会减轻脑外伤后炎性反应所致的继发性脑损害。
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