近年来我国恶性肿瘤的发病率呈上升趋势,癌症日益危害着我国居民的生命健康,给社会带来了沉重的经济负担,癌症已成为我国公共卫生领域面临的严重挑战。恶性肿瘤具有浸润和转移能力,生长速度快。肿瘤血管生成在肿瘤的发生、发展和转移中扮演者重要角色。抑制肿瘤血管的生成,从而抑制肿瘤的血氧供应,对肿瘤的治疗有重要意义。肿瘤血管生成是一个复杂的过程,由多种细胞因子促使,其中,血管内皮生长因子（VEGF）是主要的影响因子。血管内皮生长因子（VEGF）与其受体VEGFR相结合激活胞内酪氨酸激酶,启动下游细胞信号,促使新生血管生成。VEGF通路是肿瘤和眼科黄斑病变等疾病治疗中重要的靶点。目前,已有数种单克隆抗体药物应用于VEGF通路的阻断治疗,但传统单克隆抗体往往相对分子质量较大,其稳定性、亲和力、特异性和组织穿透能力仍亟待提高。纳米抗体具有相对分子质量小,可穿透血脑屏障,组织穿透性强,稳定性高,特异性强等优点,是抗体发展的一个极具潜力的方向。因此,本文研究了VEGF纳米抗体的筛选,希望为开发抗肿瘤纳米抗体药物奠定一定基础。本文首先根据血管内皮生长因子（VEGF）与其受体VEGFR相结合部位的蛋白编码区序列设计引物,使用实验室human-c DNA作为PCR的模板,使用V29H载体为大肠杆菌原核表达的载体,分别构建了VEGF与VEGFR-2原核表达的质粒。将VEGF与VEGFR-2的原核表达菌株进行大规模培养诱导后纯化得到了VEGF与VEGFR-2的蛋白。同时也构建了真核表达的质粒,选择p TT5载体作为哺乳动物细胞表达的载体,构建了VEGF真核表达的质粒。将质粒转染细胞之后纯化得到纯的蛋白。将得到的蛋白进行分析型超速离心检测,证明真核系统表达的VEGF蛋白是二聚体,这与实际相符。为了得到纳米抗体,本文使用纯化的真核表达的VEGF蛋白免疫羊驼,免疫周期结束后从羊驼的颈静脉抽血分离外周血淋巴细胞,从分离的外周血中提取RNA,反转录成c DNA。把反转录成的c DNA作为扩增羊驼VHH区的模板,构建噬菌体展示文库。利用ELISA实验以低浓度的抗原包被,筛选出与VEGF特异性结合的纳米抗体。选取了其中的4个纳米抗体序列,先构建了真核表达,连载到p TT5载体上,然后转染细胞,纯化时未发现蛋白表达。接着又构建了原核表达,连接到p ET22b上,其中的6F纯化时表达了蛋白。为了验证所筛选的纳米抗体与抗原是否特异性结合,设计了ELISA实验,结果表明所筛选的纳米抗体6F与抗原VEGF具有较高的亲和力。综上所述,实验结果表明,VEGF既可以在原核系统表达也可以在真核系统表达,但是原核系统表达的蛋白存在杂带。筛选出的纳米抗体在真核系统没有表达,但原核系统可以表达,所筛选的纳米抗体6F与抗原VEGF有较高的亲和力,这一结果将可以给抗肿瘤纳米抗体药物的开发提供帮助。