【摘 要】
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研究背景:荷青花[Hylomecon japonica（Thunb.）Prantl＆Kündig],罂粟科荷青花属的多年生草本植物,主要分布在中国东北,华北等海拔300-1800米地区。荷青花药用部位多为根茎,全年可采,具有祛风湿,散瘀消肿,止血止痛等作用。荷青花全草富含生物碱类,酚类,萜类,黄酮类,皂苷类及其它生物活性成分,有抗菌,抗炎,抗癌等药用价值。目的:1.建立荷青花中总皂苷（THS）及荷
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研究背景:荷青花[Hylomecon japonica（Thunb.）Prantl＆Kündig],罂粟科荷青花属的多年生草本植物,主要分布在中国东北,华北等海拔300-1800米地区。荷青花药用部位多为根茎,全年可采,具有祛风湿,散瘀消肿,止血止痛等作用。荷青花全草富含生物碱类,酚类,萜类,黄酮类,皂苷类及其它生物活性成分,有抗菌,抗炎,抗癌等药用价值。目的:1.建立荷青花中总皂苷（THS）及荷青花皂苷A的含量测定方法。2.优化荷青花总皂苷提取工艺,建立荷青花总皂苷HPLC特征指纹图谱。3.优选大孔树脂型号,优化荷青花总皂苷（THS）的纯化工艺。方法:1.以荷青花皂苷A为标准品,配置对照品溶液,通过比色法（取0.3ml对照品溶液干溶剂挥干,加入0.2ml 8%香草醛乙醇溶液和5ml 72%硫酸,摇匀,90℃水浴15-20min,510nm下测定吸光度）和HPLC法（A:乙腈,B:0.1%甲酸水溶液,206nm下测定峰面积）分析对照品,建立回归方程,并进行方法学验证。2.通过对提取过程中的溶剂选择、时间、次数和固液比的考察,优化超声提取THS的提取工艺,提取11批次荷青花总皂苷。以分离出来的荷青花皂苷标准品为参照物,建立荷青花总皂苷HPLC特征指纹图谱。使用软件进行相似度计算。3.通过静态吸附、解吸试验与静态吸附曲线确定最佳大孔树脂类型,通过单因素试验与Box-Behnken design expert法确定大孔树脂纯化荷青花总皂苷工艺参数。结果:1.比色法测量荷青花皂苷A含量的回归方程为:y=0.9353x-0.0284,R~2=0.9962;HPLC法测量荷青花皂苷A回归方程为:y=2,782,194.84 x+16,522.80,R~2=0.999,二者皆回归效果显著,线性良好。2.最佳提取工艺为:荷青花干燥全草10g,浸泡于15倍体积（150ml）的50%乙醇溶液中,超声提取三次,每次1.5h。以荷青花皂苷A为参考,11批次荷青花总皂苷的特征指纹图谱相似性大于0.9,通过“中药指纹图谱相似性评价软件2012版”得出了对照指纹图谱。3.NKA-9型号的树脂的吸附纯化荷青花总皂苷效果较好,纯化总皂苷时最佳上样量为50mg/ml,流速为1.9ml/min,体积为1BV,最佳洗脱浓度为50%乙醇,流速为4.3ml/min,体积为7BV。结论:1.实验得出的荷青花中总皂苷及荷青花皂苷A的含量测定方法符合药典方法学规定,可用于荷青花皂苷类化合物的定量分析。2.荷青花总皂苷HPLC特征指纹图谱整体相似性良好,为后续荷青花药材研究提供参考。3.NKA-9型大孔树脂纯化荷青花总皂苷效果良好,优化后其工艺稳定可行。
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