水甘油通道蛋白基因StFPS1对玉米大斑病菌生长发育及侵染能力的影响

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:laowu000001
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本实验室在前期研究中已经获得了玉米大斑病菌水甘油通道蛋白基因StFPS1,本研究在此基础上,采用RNAi技术获得了该基因的沉默转化子;通过比较转化子与野生型菌株在生长发育、侵入能力及其对高渗透胁迫的反应,明确该基因的功能。主要研究结果如下:(1)以pSilent-1质粒为基本骨架,构建了玉米大斑病菌水甘油通道蛋白基因StFPS1的RNAi载体,转化野生型菌株原生质体,利用潮霉素B抗性、RT-PCR筛选得到了2株StFPS1基因的RNAi转化子,分别命名为fps1-1和fps1-2;利用Real-timeRCR技术确定转化子中StFPS1基因表达水平分别为野生型的0.34%和5.49%。(2)与野生型菌株相比,转化子在PDA培养基上生长速度降低,产孢量降低,基因沉默较强的菌株(fps1-1)失去产孢能力;菌丝分隔变长,细胞膨大,且基因沉默强的菌株(fps1-1)菌丝出现弯曲。表明StFPS1基因与玉米大斑病菌菌丝发育及分生孢子的产量密切相关。(3)在0.5M NaCl高渗胁迫处理下,与野生型菌株相比,转化子菌落生长速率受抑制程度低;转化子菌丝细胞膨大为球型,分隔增多,间距变短,菌丝内甘油含量明显高于野生型。说明StFPS1基因参与玉米大斑病菌高渗胁迫反应,且起负调控作用。(4)与野生型相比,转化子fps1-2附着胞发育延迟,能穿透玻璃纸,转化子fps1-1不产生附着胞,不能穿透玻璃纸。说明StFPS1基因影响玉米大斑病菌附着胞发育及侵染能力。(5)通过透射电镜观察发现,与野生型相比,转化子fps1-1细胞壁明显变薄;转化子对Congo red、CFW、SDS等细胞壁合成抑制剂的敏感性下降。说明StFPS1基因与玉米大斑病菌细胞壁的形态建成密切相关。(6)利用Real-time RCR技术分析转化子中HOG-MAPK级联途径和CWI-MAPK级联途径关键基因(StSHO1、StHOG1、StSLT2)基因的表达水平,发现与野生型相比基因表达水平均明显下降。预示着StFPS1基因沉默不仅干扰了HOG途径,也干扰了细胞壁完整性(CWI)途径。
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