【摘 要】
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目的:急性心肌梗死是心血管疾病中表现最严重的一种,其治疗策略是尽快再灌注以恢复血流通畅,但随着血液供应的恢复,一系列具有损伤性的病理生理改变也会对心肌组织造成损伤,即心肌缺血再灌注损伤（Myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI）。中药在治疗MIRI中具有其独特的优势。川芎、赤芍常被用于治疗心血管疾病,两药配伍是著名的活血祛瘀药对。本研究通过冠脉结扎法制
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目的:急性心肌梗死是心血管疾病中表现最严重的一种,其治疗策略是尽快再灌注以恢复血流通畅,但随着血液供应的恢复,一系列具有损伤性的病理生理改变也会对心肌组织造成损伤,即心肌缺血再灌注损伤（Myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI）。中药在治疗MIRI中具有其独特的优势。川芎、赤芍常被用于治疗心血管疾病,两药配伍是著名的活血祛瘀药对。本研究通过冠脉结扎法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,观察川芎—赤芍“药对”对大鼠心功能、心肌组织结构形态以及对AKT和ERK1/2信号通路相关蛋白表达的影响。方法:1.实验动物分组:SPF级SD大鼠48只,雌雄各半。随机分为假手术组、模型组、川芎组、赤芍组、川芎赤芍配伍低组、川芎赤芍配伍高组六组,每组8只,连续灌胃给药14天,除假手术组外,其它组均造心肌缺血再灌注损伤模型。2.大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的建立:结扎左冠状动脉前降支30min,松开结扎线后再灌注2h。3.检测大鼠心电图及血流动力学的变化:使用Power Lab数据采集和分析系统,手术全程监测大鼠心电图（ECG）,心率（HR）,左心室收缩压（LVSP）,左心室舒张末压（LVEDP）,左心室内压最大上升下降速率（±dp/dtmax）。4.观察大鼠心肌组织结构形态改变:HE染色、透射电镜观察大鼠心肌组织病理结构改变及其超微结构的变化。5.蛋白质免疫印迹（Western blot）法:检测AKT和ERK1/2信号通路相关因子Akt、Phospho-Akt（Ser473）、Erk1/2、Phospho-Erk1（Thr202/Tyr204）/Erk2（Thr185/Tyr187）以及促凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase 3、Caspase 9的表达量,分析和探讨川芎—赤芍“药对”对MIRI模型大鼠的保护作用及其对AKT和ERK1/2信号通路的调控机制。结果:1.血流动力学结果显示:与假手术组比,模型组LVEDP水平始终高于假手术组,差异具有统计学意义（P＜0.01）;与模型组相比,川芎组LVEDP水平始终低于模型组,差异具有统计学意义（P＜0.001）;赤芍组LVSP水平高于模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）,其LVEDP水平低于模型组,差异具有统计学意义（P＜0.0001）,其HR水平高于模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）;川芎赤芍配伍低组LVEDP水平低于模型组,差异具有统计学意义（P＜0.001）;川芎赤芍配伍高组LVEDP水平低于模型组水平,差异具有统计学意义（P＜0.0001）。以上治疗组血流动力学指标均有所改善,证明川芎、赤芍及两药配伍使用均可对缺血再灌注后大鼠的心脏功能发挥一定的保护作用。2.HE染色结果显示:与假手术组对比,模型组出现大量炎性浸润的现象,心肌纤维出现部分溶解;与模型组对比,各治疗组的心肌组织肌纤维断裂溶解情况均有所减轻,炎性浸润现象减少,心肌细胞排列更整齐。3.透射电镜观察结果显示:与假手术组对比,模型组肌丝结构紊乱,线粒体堆积肿胀且空化严重;与模型组对比,治疗组的损伤有所缓解,肌丝走向更加完整,线粒体肿胀和空化现象均减轻。4.Western blot法检测结果显示:与假手术组比,模型组Akt、P-Akt、P-ERK1/2蛋白表达水平均高于假手术组,ERK1/2蛋白表达水平也高于假手术组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,模型组Cleaved-Caspase 3和Caspase 9蛋白水平也高于假手术组;与模型组相比,治疗组Akt蛋白表达水平均低于模型组,其中川芎赤芍配伍低组与模型组相比,差异具有统计学意义（P＜0.01）,治疗组P-Akt蛋白表达水平均高于模型组,川芎赤芍配伍高组与模型组相比,差异有统计学意义（P＜0.01）;治疗组ERK1/2蛋白表达水平均低于模型组,P-ERK1/2蛋白表达水平均高于模型组,其中赤芍组与模型组相比,差异具有统计学意义（P＜0.05）,川芎赤芍配伍高组与模型组相比,差异具有统计学意义（P＜0.01）,治疗组Cleaved-Caspase 3和Caspase 9蛋白的相对表达量均低于模型组。结论:川芎—赤芍“药对”能改善大鼠MIRI后的心功能指标,改善心肌组织病理及其超微结构状态,可促进MIRI模型大鼠心肌组织中AKT、ERK1/2蛋白磷酸化,激活AKT和ERK1/2信号通路,降低促凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3及Caspase 9的相对表达量,减少心肌细胞凋亡,对MIRI发挥保护作用。
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