铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种分布广泛的条件致病菌,常在临床上引起顽固性、难治性感染,成为临床治疗的棘手问题.鞭毛作为铜绿假单胞菌主要的运动器官和重要的毒力因子,对铜绿假单胞菌致病和生物被膜的形成中起着重要作用.该文以一株临床分离的铜绿假单胞菌PA68做受体菌,应用Mu转座复合物技术从反向遗传学的角度对鞭毛运动的相关基因进行研究.该文首次将Mu转座复合物技术应用到假单胞菌的功能基因组研究,成功优化条件将Mu转座复合物转入到铜绿假单胞菌PA68中,得到3.66 x 10<4>CFU/μ g DNA的高转化效率,构建了菌株PA68的Mu转座突变文库.对Mu转座突变子进行泳动和蜂群运动能力的检测,筛选出鞭毛运动能力缺陷型突变子6株,经过Southern Blot鉴定、基因克隆、核苷酸测序研究,鉴定出了转座子插入到基因组中的位置.结果表明,6个鞭毛运动能力缺陷型突变子中,转座子分别插入到5个基因uvrP、zwf、phzF1、PA0171和PA0413的内部.PA0171则属于功能完全未知的基因.对基因PA0171进行了全序列测定,同时利用遗传重组和遗传互补实验进一步研究基因PA0171的功能,结果表明,携带PA0171基因的表达质粒pDN-PA0171使突变子PA68PA0171::Mu的泳动能力恢复至正常水平,蜂群运动能力部分回复;根据同源重组原理,在铜绿假单胞菌标准株PAO1中构建了基因PA0171突变子.运动能力检测显示,突变子PAO1PA0171::Gm丧失了鞭毛运动能力,实验结果证明PA0171基因参与了P.aeruginosa的鞭毛运动.在电子显微镜下观察PA0171突变子的细菌形态,结果表明,PA0171突变子的鞭毛形态没有明显变化,说明PA0171基因可能为鞭毛运动的调节基因.该文利用Mu转座酶复合物技术首次证明PA0171与P.areuginosa的鞭毛运动相关.