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背景托灭酸(Tolfenamic acid,2-[(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸)是一种新型的非甾体类抗炎药,其作用机理是通过抑制环氧合酶的产生而发挥解热镇痛的作用,目前临床上主要应用于类风湿关节炎、偏头痛等疾病的治疗。近年来,国内外学者对此进行了多方面的研究,发现托灭酸在抑制肿瘤细胞生长、诱导细胞凋亡、干扰细胞信号转导、调节原癌基因与抑癌基因活性、抑制肿瘤血管形成等也发挥重要作用,对胰腺癌、食管癌、结直肠癌等消化系统恶性肿瘤都显示出抑制作用,但尚未报道托灭酸对胃癌的抗肿瘤活性,本课题旨在利用流式细胞术检测AGS细胞凋亡率、MTT法检测细胞增殖情况、Western Blotting法检测Bcl-2与Bax蛋白相对表达量等手段初步探索托灭酸对胃癌AGS细胞的抗肿瘤作用。目的研究托灭酸对胃癌AGS细胞的抗肿瘤效果及其机制。方法1.通过Annexin V FITC/PI双染色,流式细胞术检测探讨托灭酸对胃癌AGS细胞凋亡率的影响;2.通过MTT法测试不同浓度、不同时间托灭酸对胃癌AGS细胞生长的影响,并绘制生长曲线图;3.通过Hochest 33258核染色检测托灭酸对AGS细胞凋亡的影响,并与对照组对比,在荧光显微镜下观察细胞凋亡的差异;4.通过Western Blotting法检测托灭酸作用下凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax相对表达量及Bcl-2/Bax比值。结果1.阴性对照组、50 μ mol/L、100 μmol/L、200 μ mol/L托灭酸组作用24小时后行流式细胞术检测凋亡率(%)分别为15.32±2.26、29.87±4.76、54.82±4.49、72.13±5.53。与对照组相比,托灭酸不同浓度的处理组对胃癌细胞的促凋亡作用明显增加,并且凋亡率随着药物浓度梯度的增高而增高(P<0.05)。2.胃癌 AGS 细胞经 50 μmmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L 托灭酸处理后 24h、48h、72h后,MTT法检测提示与阴性对照组对比,细胞增殖能力受到明显抑制(/<0.05),并且随着药物浓度的增大,抑制能力也增强(P<0.05)。3.对照组凋亡细胞数为2.32±0.54,托灭酸组为9.17士 1.38,P<0.05。与对照组相比,托灭酸组细胞在托灭酸作用24小时后,Hoechst 33258染料核染色显示,浓染与碎裂细胞明显增多。4.通过 Western Blotting 法检测 50 μ mol/L、100 μ mol/L、200 μ mol/L 托灭酸处理后AGS细胞Bcl-2与Bax蛋白相对表达量,其中Bcl-2分别为1.42±0.11、0.95±0.14、0.63±0.08,Bax 蛋白分别为 0.28±0.03、0.57±0.05、0.86±0.09,P<0.05,可以看出随着药物浓度的增加,Bcl-2/Bax蛋白比例减少。结论1.托灭酸可通过抑制胃癌AGS细胞生长增殖和促进细胞凋亡以达到抗肿瘤的作用。2.托灭酸促进胃癌AGS细胞凋亡的作用与Bcl-2蛋白表达的降低与Bax蛋白表达的增加有关。