HULC lncRNA实时荧光定量检测方法建立、应用及其在髓系白血病的功能研究

被引量 : 0次 | 上传用户:hxz22
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:1.建立实时荧光定量PCR检测肝癌高表达长链非编码RNA(highly up-regulated in liver cancer long non-coding RNA, HULC lncRNA)的方法;2.利用建立的实时荧光定量PCR方法检测HULC lncRNA在实体肿瘤组织、髓系白血病外周血白细胞(WBCs)和肿瘤细胞株的表达量,并比较表达量的差异;3.利用RNA干扰技术,研究HULC lncRNA对髓系白血病细胞株的相关功能。方法:1.根据Genebank中的HULC lncRNA(AY914050.1)全序列,设计HULC lncRNA基因的特异引物,构建HULC lncRNA和β-actin基因的T克隆载体,分别命名为pMD18-T-HULC lncRNA和pMD-β-actin;以pMD18-T-HULC lncRNA和pMD-β-actin为实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA的标准品。以SYBR GreenⅡ为染料,建立实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA的方法并进行方法学评价;2.应用此方法检测8种肿瘤细胞株、肝癌组织、其它癌及癌旁组织、粒系白血病病人及健康人外周血WBCs中HULC lncRNA表达水平,并比较其表达量的差异;3.构建靶向干扰HULC lncRNA的shRNA载体,脂质体转染法将HULC lncRNA-shRNA载体转染白血病细胞株K562,G418筛选获得细胞系HULC lncRNA-shRNA-K562,通过已建立的实时荧光定量方法检测细胞系中HULC lncRNA基因表达水平。通过MTT和流式细胞术观察细胞增殖、细胞周期、凋亡等恶性生物学行为的改变。结果:1.建立了HULC lncRNA实时荧光定量PCR检测方法。方法的最低检测限为1.80×10~3拷贝/L;线性范围为1.80×10~3拷贝/L~1.80×10~13拷贝/L;批内变异系数CV<2.0%,批间CV<8.0%。2. HULC lncRNA在肝癌组织表达量为(2.01±0.32)×10~5拷贝/L,明显高于其它实体肿瘤及其癌旁组织HULC lncRNA表达量(<1.80×10~3拷贝/L)。新发现膀胱癌细胞株T24中表达量高[(1.41±0.54)×10~5拷贝/L],但在膀胱癌组织中表达低(<1.80×10~3拷贝/L)。也新发现慢性粒细胞白血病细胞株K562有HULC lncRNA表达,与肝癌细胞株HepG2中表达量比较,没有明显差异(P>0.05);急、慢性粒性白血病病人外周血WBCs中可检测到HULC lncRNA的明显表达,其中急性粒性白血病病人阳性表达率为80%,慢性粒性白血病病人阳性表达率则为79%;而健康人外周血WBCs均无表达。3.建立了HULC lncRNA-shRNA-K562(干扰组)和HK-K562(阴性对照组)细胞组。干扰组的HULC lncRNA基因的表达水平和细胞增殖能力较阴性对照组和K562(空白组)明显下降(P<0.05),而阴性对照组与空白组间无明显差异(P>0.05);干扰组、阴性对照组和空白组处于G0/G1期的细胞分别为(68.85±0.27)%、(53.05±0.35)%和(53.54±0.33)%;细胞凋亡率分别为(9.6±0.20)%、(1.79±0.23)%和(1.75±0.20)%;干扰组与其他2对照组比较,差异显著(P<0.05)。结论:1.成功建立了实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA的方法。2.新发现髓系白血病人外周血WBCs及细胞株K562中存在HULClncRNA表达,HULC lncRNA表达可能在髓系白血病的诊断和治疗上有一定意义。3.利用RNA干扰技术成功构建了靶向干扰HULC lncRNA的细胞系HULC lncRNA-shRNA-K562,发现HULC lncRNA也参与了髓系白血病细胞株K562的增殖、细胞周期及凋亡的调控,并为HULC lncRNA分子的作用机制研究提供细胞模型。
其他文献
<正> 下面五组句子,每组两个句子中用相同的连接词引导不相同的状语从句,需要注意辨别。Ⅰ.(1) If you ask him,he will help you.(2) If he is poor,at least he honest. 句
目的:研究补益肝肾中药复健片治疗缺血性卒中的临床疗效及其干预局灶性脑缺血(MCAO)大鼠脑内MMP-2和MMP-9的表达,探讨复健片对缺血性卒中胶质瘢痕形成的影响。方法:临床研究将符合
高等教育的目标是培养高素质的人才。随着知识经济时代的到来,教育模式由"应试教育"向"素质教育"转化。高等教育推进素质教育,关键在教师。只有教师的全面发展,才会有学生的
宋朝是中国历史上经济、文化最为繁荣的时代之一,源远流长的赏石文化和赏石绘画艺术也是在此期间达到了鼎盛和辉煌。观赏石是大自然赋予人类的宝贵财富,中华文化也蕴含有丰富的
慢性下腰痛(CLBP)发病率高,医疗支出代价大,且严重影响患者的生活质量,对慢性下腰痛的康复治疗研究是一个不容忽视的社会问题。采用运动疗法治疗慢性下腰痛已达成共识,欧洲非特异性
<正> 前缀加于不同的动词,起着不同的作用,在一种情况下,只具有语法功能,加于动词,构成完成体;在另一种情况下,只具有一定的词汇意义,没有语法功能。当然还有第三种情况,即既
随着社会经济的不断发展,各个区域的现代化建设愈加强化,都市型现代农业作为时代发展的新兴产物,得到了各国专家学者的普遍关注和重视。成都市地处我国西南地区,位于四川盆地
电与磁在生活中有广泛应用,相关命题在高考中“出镜率”较高。笔者应用安培力等电磁规律自制旋转的线圈、电池,神奇的纸喇叭、纸话筒和电磁弹射装置。通过视听体验,直观呈现物理
上市公司对促进国民经济和资本市场的发展发挥着重要的作用。从1993年,河南省有了第一家上市公司中原环保股份有限公司以来,到2012年末河南省的上市公司数量达66家,这些上市公司
《红楼梦》通过贵族青年贾宝玉和林黛玉之间的爱情悲剧,写出以贾府为中心的四大封建家族的兴衰,揭露了封建社会后期的种种黑暗和罪恶。《源氏物语》成书于十一世纪初,反映了