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目的:1.建立实时荧光定量PCR检测肝癌高表达长链非编码RNA(highly up-regulated in liver cancer long non-coding RNA, HULC lncRNA)的方法;2.利用建立的实时荧光定量PCR方法检测HULC lncRNA在实体肿瘤组织、髓系白血病外周血白细胞(WBCs)和肿瘤细胞株的表达量,并比较表达量的差异;3.利用RNA干扰技术,研究HULC lncRNA对髓系白血病细胞株的相关功能。方法:1.根据Genebank中的HULC lncRNA(AY914050.1)全序列,设计HULC lncRNA基因的特异引物,构建HULC lncRNA和β-actin基因的T克隆载体,分别命名为pMD18-T-HULC lncRNA和pMD-β-actin;以pMD18-T-HULC lncRNA和pMD-β-actin为实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA的标准品。以SYBR GreenⅡ为染料,建立实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA的方法并进行方法学评价;2.应用此方法检测8种肿瘤细胞株、肝癌组织、其它癌及癌旁组织、粒系白血病病人及健康人外周血WBCs中HULC lncRNA表达水平,并比较其表达量的差异;3.构建靶向干扰HULC lncRNA的shRNA载体,脂质体转染法将HULC lncRNA-shRNA载体转染白血病细胞株K562,G418筛选获得细胞系HULC lncRNA-shRNA-K562,通过已建立的实时荧光定量方法检测细胞系中HULC lncRNA基因表达水平。通过MTT和流式细胞术观察细胞增殖、细胞周期、凋亡等恶性生物学行为的改变。结果:1.建立了HULC lncRNA实时荧光定量PCR检测方法。方法的最低检测限为1.80×10~3拷贝/L;线性范围为1.80×10~3拷贝/L~1.80×10~13拷贝/L;批内变异系数CV<2.0%,批间CV<8.0%。2. HULC lncRNA在肝癌组织表达量为(2.01±0.32)×10~5拷贝/L,明显高于其它实体肿瘤及其癌旁组织HULC lncRNA表达量(<1.80×10~3拷贝/L)。新发现膀胱癌细胞株T24中表达量高[(1.41±0.54)×10~5拷贝/L],但在膀胱癌组织中表达低(<1.80×10~3拷贝/L)。也新发现慢性粒细胞白血病细胞株K562有HULC lncRNA表达,与肝癌细胞株HepG2中表达量比较,没有明显差异(P>0.05);急、慢性粒性白血病病人外周血WBCs中可检测到HULC lncRNA的明显表达,其中急性粒性白血病病人阳性表达率为80%,慢性粒性白血病病人阳性表达率则为79%;而健康人外周血WBCs均无表达。3.建立了HULC lncRNA-shRNA-K562(干扰组)和HK-K562(阴性对照组)细胞组。干扰组的HULC lncRNA基因的表达水平和细胞增殖能力较阴性对照组和K562(空白组)明显下降(P<0.05),而阴性对照组与空白组间无明显差异(P>0.05);干扰组、阴性对照组和空白组处于G0/G1期的细胞分别为(68.85±0.27)%、(53.05±0.35)%和(53.54±0.33)%;细胞凋亡率分别为(9.6±0.20)%、(1.79±0.23)%和(1.75±0.20)%;干扰组与其他2对照组比较,差异显著(P<0.05)。结论:1.成功建立了实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA的方法。2.新发现髓系白血病人外周血WBCs及细胞株K562中存在HULClncRNA表达,HULC lncRNA表达可能在髓系白血病的诊断和治疗上有一定意义。3.利用RNA干扰技术成功构建了靶向干扰HULC lncRNA的细胞系HULC lncRNA-shRNA-K562,发现HULC lncRNA也参与了髓系白血病细胞株K562的增殖、细胞周期及凋亡的调控,并为HULC lncRNA分子的作用机制研究提供细胞模型。